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邻苯二酚1，2—双加氧酶(cαtA)基因是芳香族化合物降解途径中的一个关键酶基因，它所编码的酶能将邻苯二酚降解成顺，顺—已二烯二酸。根据已报道Pseudomonas putida的cαtA基因序列，合成寡核苷酸引物，用本实验室保存的Pseudomonas B3—1的总DNA为模板，通过PCR方法扩增出cαtA全基因序列，测序分析表明该片段与Genbank上报道的Pseudomonas putida W619的catechol1，2—dioxygenase基因在核苷酸水平有87％的相似性，氨基酸水平具有90％的相似性。
根据DNA同源重组的原理，利用自杀质粒pK18mob构建含有部分cαtA基因片段的重组质粒，通过三亲本结合法导入野生菌株Pseudomonas B3—1中，在抗性平板上筛选得到突变菌株Pseudomonas B3—1TB。对突变株进行研究发现，Pseudomonas B3—1TB的cαtA酶活只有野生菌株PseudomonasB3—1cαtA酶活的30％，突变体Pseudomonas sp.B3—1TB培养液中邻苯二酚含量达到1.085mg/ml，与原始菌相比提高了43.0％。对突变菌株生产邻苯二酚的发酵条件进行了优化，结果表明，当培养基中苯甲酸钠浓度为4.0g/L，培养温度为32℃，pH值为6.0时，培养液中邻苯二酚含量达到1.222mg/ml，比优化前提高了12.6％，比野生菌株提高了70.2％。
进一步对发酵反应液中邻苯二酚的分离纯化工艺进行研究，得到了较佳的萃取工艺条件：乙酸乙酯为萃取剂，萃取温度为室温(25℃)，萃取时间为10min，相比为0.7，静置时间为10min，磁力搅拌转速为500rpm，调整反应液的pH值为8.0，采用二级错流萃取。在该萃取工艺条件下，邻苯二酚的萃取率可达99.14％。采用条件压强为0.02MPa，温度为55℃，减压蒸馏操作方式，邻苯二酚的蒸馏回收率达到94.37％。整个工艺提纯邻苯二酚的总回收率高达93.56％。