海洋来源真菌Aspergillus flavus OUCMDZ-2205活性次生代谢产物的研究

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海洋来源微生物已经成为开发海洋药物重要来源,海洋来源真菌、放线菌以及细菌的次级代谢产物均显示出新颖的结构和独特的活性。生物碱类是天然产物中一类重要的化合物,在许多药物和活性先导化合物中都能找到生物碱类物质。本论文按照天才菌株筛选模型方法,通过TLC生物碱特征显示等方法寻找次级代谢物中具有生物碱类化合物的菌株。本论文分离来自西沙群岛海域、涠洲岛、东营黄河口、连云港附近海域的动物植物泥土以及海水等不同海洋来源的样品进行海洋微生物分离,先后分离的到海洋微生物真菌125株、放线菌19株。通过结合菌株活性筛选,发现了既有代谢生物碱类物质,又显示了较好活性的菌株Aspergillus flavus作为最终发酵菌株,并对其次级代谢产物进行了系统的研究。此外,并用对这些单体化合物进行了抗肿瘤活性和细菌抑制活性的初步评价。运用薄层色谱,正相硅胶柱色谱,反相硅胶柱色谱,Sephadex LH-20凝胶柱色谱,大孔树脂色谱,反相高效液相色谱等常规手段,分离纯化到12个单体化合物。根据核磁、红外、紫外、CD等波谱数据,并结合理化性质以及X-ray单晶颜色对这些单体化合物进行结构解析。同时通过CD比对等方法确定化合物的构型,鉴定得到了12个化合物的结构:(3S,5bR,7aS,13bS,13cS,15aS)-2,2,13b,13c-tetramethyl-10-(2-methylbut-3-en-2-yl)-5b,6,7,7a,8,13,13b,13c,14,15-decahydro-2H-3,15a-epoxyoxepino [2",3":5’,6’]benzo[1’,2’:6,7] indeno[1,2-b]indol-4(3H)-one (1)、(2R,4bS,6aS,12bS,12cR)-4b-hydroxy-2-(2-hydroxypropan-2-yl)-6a,12b,12c-trimethyl-9-(2-methylbut-3-en-2-yl)-5,6,6a,7,12,12b,12c,13-octahydro-2H-chromeno[5’,6’:6,7]indeno[1,2-b]indol-3(4bH)-one (2)、β-Aflatrem (3)、 Paspalinine (4)、α-Cyclopiazonic acid (5)、iso-a-Cyclopiazonic acid (6)、Aflatoxin B1(7)、Ditryptophenaline (8)、Leporin B (9)、6,8-dimethoxy-citreoisocoumarin (10)、7-O-acetyl-kojic acid (11)、Kojic acid (12)。12个化合物中,其中有4个为吲哚二萜类化合物,化合物1和化合物2为新化合物;其他化合物中,化合物10为新化合物。采用MTT法对分离的到的单体化合物进行对人胸腺癌细胞MCF-7的体外抗肿瘤活性评价。活性结构显示:化合物6对人胸腺癌细胞MCF-7有较好的抗肿瘤活性。采用纸片法对8种致病菌进行了抑菌活性测试,结果显示化合物1、化合物7和化合物9对金黄色葡萄球菌具有较强的抑制活性。化合物7对产气杆菌有较弱的抑制活性,化合物11和12有较好的抗氧化活性。综上所述,本文阐述了菌株Aspergillus flavus.次级代谢物产物抗肿瘤活性物质基础,同时获得生物碱类的新结构化合物,为抗肿瘤药物研究提供了新的备选化合物,丰富了海洋来源天然产物类型和数目。
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