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目的:环维黄杨星D,亦称黄杨宁、环常绿黄杨碱D、黄杨碱等是从黄杨科植物小叶黄杨及其同属植物中提取的一种生物碱,有保护神经元、抗心律失常及心肌缺血等药理作用,临床常用于冠心病心绞痛、心功能不全的治疗。川考嗪是由中药伞形科植物川考(Ligusticum Chuanxiong)的根茎提取的有效活性成分,属酰胺类生物碱,具有扩张外周血管和降低血压、改善脑循环、抑制血小板聚集、抗血栓的药理作用,广泛用于缺血性心、脑血管疾病的治疗,并取得较好的疗效。本研究旨在利用新型靶向剂型——脂质体,增强环维黄杨星D与盐酸川芎嗪的生物利用度,并通过葡萄糖基修饰增强脂质体的脑靶向优势。方法:1、环维黄杨星D HPLC-MS/MS分析方法的优化。本研究优化了环维黄杨星D HPLC-MS/MS分析方法,并进行该色谱条件的专属性、标准曲线、精密度、稳定性等方法学考察。2、环维黄杨星D柱前衍生化法HPLC分析方法的优化。本研究优化了环维黄杨星D柱前衍生化法HPLC分析方法,并进行该色谱条件的专属性、标准曲线、精密度、稳定性等方法学考察。3、盐酸川芎嗪HPLC分析方法的优化。川芎嗪化学结构为四甲基吡嗪。本研究采用HPLC法对盐酸川芎嗪的含量测定的分析方法,并对该色谱条件的专属性、标准曲线、精密度、稳定性等进行方法学考察。4、复方芎黄普通脂质体的制备及制剂学评价。采用薄膜分散-pH梯度法制备脂质体,以包封率为指标,单因素考察卵磷脂与胆固醇的质量比、磷脂与药物的质量比、成膜时间、水化温度与时间、水化液种类、ph梯度等条件,并通过脂质体形态、粒径、电位和稳定性等进行制剂学评价。5、葡萄糖修饰复方芎黄脂质体的制备及制剂学评价。通过质谱确证葡萄糖基配体胆固醇-癸二酸-葡萄糖酯(CHS-SE-GLU)合成结构,确定酶促合成葡萄糖基配体是否成功。通过正交设计实验优化葡萄糖修饰复方芎黄脂质体的制备处方比例,并通过脂质体形态、粒径、电位和稳定性等进行制剂学评价。成果:1、成功优化环维黄杨星D的HPLC-MS/MS分析方法。色谱条件:色谱柱:Waters Xterra MS C18(2.1×50 mm 3.5μm);流动相:乙腈(A)-含0.1%甲酸的0.01 mol/L甲酸铵溶液(B),梯度洗脱;流速:0.35 mL/min;柱温:30℃;进样量:5μL。质谱条件:离子源:电喷雾电离源(ESI);离子模式:正离子模式;毛细管电压:4.0 kV;喷嘴电压:500 V;干燥器温度:300℃;干燥器流速5 L/min;鞘气温度:250℃;鞘气流速:11 L/min;扫描方式:多反应监测模式(MRM),检测离子对为m/z403.4→372.1,(定量离子对),裂解电压为82 V,碰撞能为25 eV。该方法专属性高、精密性强,重复性良好,符合对环维黄杨星D定量分析要求。2、成功优化环维黄杨星D柱前衍生化法HPLC分析方法。色谱条件:仪器:岛津LC-20A;色谱柱:安捷伦C18(4.6*250mm 5μm);流动相:甲醇:水=83:17;流速:1mL/min;检测波长:240nm;柱温:30℃;进样量:20 μL。该方法专属性高、精密性强,重复性良好,符合对环维黄杨星D定量分析要求。3、成功优化盐酸川芎嗪的HPLC分析方法。色谱条件:仪器:岛津LC-20A;色谱柱:安捷伦C18(4.6*250mm 5μm);流动相:甲醇:水=65:35;流速:0.7mL/min;检测波长:280nm;柱温:30℃;进样量:20 μL。该方法专属性高、精密性强,重复性良好,符合对盐酸川芎嗪定量分析要求。4、优化了复方芎黄普通脂质体制备工艺。经考察后发现,当卵磷脂:胆固醇=7:1;卵磷脂:维生素E=20:1;卵磷脂:十八胺=20:1;卵磷脂:环维黄杨星D:盐酸川芎嗪=100:10:2.5,以无水乙醇超声溶解,45℃减压蒸发1 h,再以pH=3磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲液水化至磷脂浓度20 mg/mL;探头超声超3 s停3 s,共3 min;超声后的脂质体过0.22 μm微孔滤膜3次;以1 mol/L NaOH溶液调节至pH=9,60℃孵育5 min,制得的脂质体包封率最高,包封率为盐酸川芎嗪:(80.15±2.31)%,环维黄杨星D:(99.95±0.03)%。同时对复方芎黄普通脂质体进行质量评价,可知其粒径为(117.97±0.93)nm,Zeta电势为(2.59±0.28)mV,PDI为(0.226±0.01)。5、成功制备了葡萄糖基配体。以乙酸乙烯酯、癸二酸、胆固醇和葡萄糖为合成原料,通过酶促反应合成葡萄糖基配体胆固醇-葡萄糖苷,并通过质谱显示ESI-MS m/z 755.59[M+Na]+,与文献描述相符。6、优化了葡萄糖修饰复方芎黄脂质体。在复方芎黄普通脂质体制备工艺基础上,以正交设计优化制备处方:卵磷脂:胆固醇的质量比为8:1,卵磷脂:盐酸川芎嗪:环维黄杨星D的质量比为100:10:2.5,胆固醇-葡萄糖苷用量为2%,制备出平均粒径为(89.95±0.44)nm,盐酸川芎嗪包封率为(64.91±1.80)%,环维黄杨星D包封率为(99.93±0.05)%的脂质体。结论:本研究通过单因素考察成功优化了复方芎黄普通脂质体的制备工艺,使脂质体中药物的包封率提高,并通过正交设计实验优化,得出一个合理且稳定的葡萄糖修饰复方芎黄脂质体制备工艺。为后续研究提供制剂基础。