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酪氨酸蛋白激酶受体（receptor tyrosine kinases,RTKs）在细胞生长和分化过程中起着重要作用,参与了胚胎发育、细胞生长、恶性转化及肿瘤侵袭转移等许多过程。作为PTK最大亚族Eph（erythropoietin producing hepatoma cell line）受体激酶家族中的一个成员,EphA2在成熟上皮细胞中表达水平很低,通过与细胞表面配体Ephrin（EFN）A1-5的结合导致EphA2受体发生磷酸化,并且通过其下游信号调节细胞正常生长、发育等,同时也能促进EphA2受体自身的降解。而在肿瘤细胞中,EphA2却通常处于失磷酸化状态且高表达。研究表明,EphA2在调节人类上皮来源的肿瘤细胞生长、生存、迁移及肿瘤血管形成中有潜在的作用。同时EphA2广泛高表达于人类许多恶性肿瘤,在乳腺癌、黑色素细胞瘤、食管癌、非小细胞癌、大肠癌、前列腺癌及卵巢癌等多种实体肿瘤组织中呈现高表达,其表达水平与肿瘤的进展及细胞恶性程度有关。细胞周期素D1（CyclinD1）作为细胞周期G1期到S期的调节蛋白,可竞争地与细胞周期素依赖激酶（CyclinDependent Kinasec,CDK）结合,并在CDK4的作用下,使Rb蛋白磷酸化。低磷酸化的Rb结合并抑制转录因子,后者激活某些基因,促使细胞进入S期。低磷酸化的Rb还可刺激CyclinD1的转录、合成和活化而导致Rb磷酸化,从而在G1晚期形成一反馈环调节CyclinD1的表达。其过表达可导致细胞周期调控异常,进而发生肿瘤。研究证实,CyclinD1在正常组织中表达量很少甚至不表达,而在前列腺癌、乳腺癌及头颈部鳞癌等许多恶性肿瘤中存在过度表达,在预示肿瘤进展和指导患者预后方面具有重要的临床意义。骨肉瘤是儿童和青少年最常见的骨组织恶性肿瘤之一,其恶性程度高。资料显示,局部浸润和肺转移而死亡的患者占骨肉瘤死亡总数的90%以上。因此,有效地预测和治疗骨肉瘤的侵袭和转移是延长患者生命的关键。联合检测EphA2和CyclinD1在骨肉瘤组织中的表达及其对临床意义研究,目前国内相关研究报道较少。本研究采用免疫组化SP法分别检测了EphA2和CyclinD1蛋白在50例骨肉瘤、20例骨软骨瘤及20例正常骨组织中的表达,分析二者联合表达与骨肉瘤发生、侵袭转移能力的相关性,寻找对骨肉瘤早期检测和控制其侵袭转移的新分子靶点。方法1.应用免疫组化SP法分别对50例骨肉瘤组织、20例骨软骨瘤组织及20例正常骨组织中EphA2和CyclinD1蛋白的表达进行检测。2.统计学处理:所有数据均经SPSS11.0软件进行统计分析。阳性率之间的比较采用χ2检验（chi-square）;两变量之间的关系分析采用相关分析。显著性水准α=0.05。结果1.正常骨组织EphA2蛋白阳性表达率为0.00%（0/20）,骨软骨瘤组织EphA2蛋白阳性表达率为0.00%（0/20）,骨肉瘤组织中EphA2蛋白阳性表达率为78.00%（39/50）;骨肉瘤组织EphA2蛋白阳性表达率与相应的骨软骨瘤组织及正常骨组织两两相比,均有统计学意义（P＜0.05）。2.正常骨组织CyclinD1蛋白阳性表达率为0.00%（0/20）,骨软骨瘤组织CyclinD1蛋白阳性表达率为0.00%（0/20）,骨肉瘤组织中CyclinD1蛋白阳性表达率为70.00%（35/50）;骨肉瘤组织CyclinD1蛋白阳性表达率与相应的骨软骨瘤组织及正常骨膜组织两两相比,均有统计学意义（P＜0.05）。3.男性、女性骨肉瘤组织EphA2蛋白阳性表达率分别为80.00%（24/30）和75.00%（15/20）,两者相比无显著性;骨母细胞型、纤维母细胞型、软骨母细胞型及其它型骨肉瘤组织中EphA2蛋白阳性表达率分别为75.00%（15/20）、86.67%（13/15）、70.00%（7/10）和80.00%（4/5）,四种病理类型之间相比,无统计学意义。4.男性、女性骨肉瘤组织CyclinD1蛋白阳性表达率分别为73.33%（22/30）和65.00%（13/20）,两者相比无显著性差异;骨母细胞型、纤维母细胞型、软骨母细胞型及其它型骨肉瘤组织中CyclinD1蛋白阳性表达率分别为65.00%（13/20）、80.00%（12/15）、70.00%（7/10）和60.00%（3/5）,四种病理类型之间相比,无统计学意义。5.Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期骨肉瘤组织中EphA2蛋白阳性表达率分别为40.00%（4/10）、72.22%（13/18）和100.00%（22/22）,Ⅲ期骨肉瘤组织中EphA2蛋白阳性表达率明显高于前两者,不同临床分期之间两两相比有显著性差异,有统计学意义。6.Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期骨肉瘤组织中CyclinD1蛋白阳性表达率分别为20.00%（2/10）、66.67%（12/18）和95.45%（21/22）,Ⅲ期骨肉瘤组织中CyclinD1蛋白阳性表达率明显高于前两者,不同临床分期之间两两相比有显著性差异,有统计学意义。7.伴有肺转移骨肉瘤组织中EphA2蛋白阳性表达率为100.00%（20/20）,无肺转移骨肉瘤组织中EphA2蛋白阳性表达率为60.00%（18/30）,两组间骨肉瘤组织EphA2蛋白阳性表达率差相比有显著性差异,有统计学意义（P＜0.05）。8.伴有肺转移骨肉瘤组织中CyclinD1蛋白阳性表达率为100.00%（20/20）,无肺转移骨肉瘤组织中CyclinD1蛋白阳性表达率为50.00%（15/30）,两组间骨肉瘤组织CyclinD1蛋白阳性表达率差相比有显著性差异,有统计学意义（P＜0.05）。9.EphA2和CyclinD1蛋白在骨肉瘤组织中的表达经统计学分析显示,两者之间呈正相关（P＜0.01）。结论1.Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期骨肉瘤组织中EphA2蛋白阳性表达率不同,随着分化程度降低,骨肉瘤组织中EphA2蛋白阳性表达率逐渐升高,Ⅲ期骨肉瘤组织中EphA2蛋白阳性表达率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期的相应组织,提示EphA2蛋白表达可能与骨肉瘤的发生、发展有关。2.Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期骨肉瘤组织中CyclinD1蛋白阳性表达率随着分化程度降低,骨肉瘤组织中CyclinD1蛋白阳性表达率逐渐升高,Ⅲ期骨肉瘤组织中CyclinD1蛋白阳性表达率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期的相应组织,提示CyclinD1蛋白表达可能与骨肉瘤的发生、发展有关。3.EphA2和CyclinD1蛋白在骨肉瘤组织中的表达经统计学分析具有相关性,表明二者可能在骨肉瘤的发生、发展及浸润、转移过程中起协同作用。