19株饲用益生菌体外性能评价及优良菌株的筛选

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本研究根据畜禽与人的消化生理异同和饲用益生菌在生产、加工中的特殊性以及使用对象的不同,体外模拟动物消化道内环境,研究饲用益生菌益生特性的评价方法,为饲用益生菌评价标准制订提供依据,并且以期得出每株菌的性能标签,筛选出优良菌种,开发优质益生菌产品。19株试验菌株源自鸡、猪肠道、岩羊羊粪和饲用益生菌产品等。通过观察其形态特征、Biolog鉴定和16SrRNA基因序列分析,结果表明有8株屎肠球菌(Enterococcusfaecium),8株粪肠球菌(Enterococcus faecalis),1株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和1株鹑鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum),均为革兰氏阳性菌株。肠球菌在MRS固体培养基上的排列方式有单个、成对和链状排列三种形式;单菌落形态为圆形,细胞呈乳白色,直径为1~2mm,半透明,细胞表面光滑,略微有凸起,边缘相对整齐。地衣芽孢杆菌在LB固体培养基上单菌落形态不规则、浅红色、长度3~6mm、不透明、边缘不整齐、表面粗糙、紧贴于培养基表面生长,显微镜下细胞呈杆状或梭状,芽孢透明、占菌体大约1/2体积;枯草芽孢杆菌在LB固体培养基上单菌落呈火山状、白色、直径2~5mm、不透明、边缘整齐、挑取菌落呈黏液状,细胞个体的显微形态多为椭圆或柱状形态,芽孢基本分布在细胞体的中心。体外条件下测定试验菌株的生长特性、产乳酸性能、人工胃肠液及胆盐耐受能力、抑制病原菌能力、产细菌素情况、药敏性、产酶性能和黏附性能,并设立对照菌株。经数据分析后,综合筛选出5株优良菌株,其生长代时小于30min、延滞期短、最大生长比速率达0.35h-1;产L-乳酸能力最高达7.3g/L;人工胃肠液和胆盐耐受性强;对常见病原菌(致病型大肠杆菌K88/K99、多杀性巴氏杆菌、鸡白痢沙门氏菌及金黄色葡萄球菌)抑制能力强,最大抑菌圈直径达22.8mm;有细菌素产生;能与常用饲用抗生素配伍使用;能产生蛋白酶和淀粉酶;对动物肠道有一定的黏附能力,为开发新型饲用益生菌产品提供了菌种准备。
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