亚麻荠高效再生体系的创建及KLU转化亚麻荠研究

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亚麻荠(Camelina sativa (L.)Crantz)属十字花科(Cruciferae)芸薹族(Sisymbrieae)亚麻荠属(Camelina),在欧洲曾被广泛种植。二战过后,由于油菜的引入及亚麻荠总体产量较低等原因,亚麻荠种植面积和总产量急剧下滑,甚至到了灭绝的地步。近些年来由于亚麻荠具有抗旱、抗病虫害、耐盐碱等优良的农艺学特征;亚麻荠具有优良的油料品质,种子油中含有丰富人体必需的多不饱和脂肪酸α-亚麻酸,与市场上普通食用油相比具有更高的食用价值;同时其种子油作为潜在的新型生物燃料工业价值巨大。因此,亚麻荠这一古老的油料作物重新被研究者重视起来。本试验选用我国新疆野生小果亚麻荠(Camelina microcarpa)与从加拿大引进的亚麻荠(Camelina sativa)的春性杂种亚麻荠为实验材料,详细研究分析了外植体,植物激素浓度配比,外植体苗龄及硝酸银浓度等因素对亚麻荠再生能力的影响,结果表明取5-6天的亚麻荠无菌苗的子叶柄作为外植体,接种于MS+BA(1.0mg/L)+NAA(0.3mg/L)分化培养基上,可以获得最高的芽再生频率(30%)和再生芽数(4.3个)。在此基础上,试验研究发现硝酸银对亚麻荠再生效率影响不显著,低浓度的硝酸银(2.5mg/L)对其分化能力有略微提高。随着硝酸银浓度的提高,硝酸银对亚麻荠的分化能力反而起到抑制作用。本研究成功创建了杂种亚麻荠的高效再生体系。为了进一步提高亚麻荠的含油量,本研究成功克隆拟南芥胚珠组织特异性INNERNO OUTER基因的启动子(pINO)和拟南芥细胞色素P450KLUH基因(KLU),以pCAMBIA2301为起始载体,构建pCambia2301::pINO::KLU植物表达载体,通过电转化法将其转入根癌农杆菌GV3101。通过农杆菌介导的Floral dip法转化亚麻荠,试验确定了Kan最适筛选浓度为50mg/L,并详细研究分析了农杆菌液浓度、渗入缓冲液对亚麻荠转化效率的影响,结果表明农杆菌液培养至OD600值为0.8,离心收集菌体后用等体积渗入缓冲液(1/2MS,蔗糖5%,Silwet L-77200μl/L,pH5.7)悬浮,待植株进入盛花期后转化亚麻荠的效率最高。Kan筛选收获的707粒T0代种子得到抗性苗107株,Kan检测阳性率为15%,PCR检测出13株阳性转基因植株,转化率为1.8%。本研究建立了一种简便高效的亚麻荠遗传转化体系,为提高亚麻荠的油料品质及产量奠定了实验基础,同时为其他植物的转基因技术提供相关的参考依据。
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