螺旋藻中γ-亚麻酸甲酯的分离纯化及其调节脂质代谢、保护内皮细胞的功效研究

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首先利用超临界CO2萃取极大螺旋藻Sprilinamaxima中的总脂,此步选用甲醇作为改性剂,通过正交试验确定了温度、工作压力、改性剂用量和CO2消耗量等工艺条件的最优化组合。所提得的总脂与5:95(V/V)的氯乙酰-甲醇作用转变为脂肪酸甲酯,脂肪酸甲酯经过冷冻结晶、两次尿素包合处理后γ-亚麻酸甲酯的含量可升高到80%左右的,接着在高真空(绝对压强10Pa以下),100-150℃条件下进行分子蒸馏,得到GLA甲酯纯品(纯度90%以上)。最后将此甲酯溶解于正己烷中,上硝酸银-硅胶柱,用正己烷-丙酮混合溶剂梯度洗脱,得到GLA甲酯高纯品(纯度可达到99%以上)。 将从螺旋藻中提取出来的γ-亚麻酸甲酯(简称GLAME),分别制成含GLAME0.25%、0.5%、1%的饲料喂饲正常大鼠和高脂膳食喂养形成的高脂血症大鼠,连续4周,测定各鼠血脂、肝脂以及血浆和肝脏丙二醛(MDA)含量。结果表明:GLAME能显著降低正常大鼠和高脂血症大鼠血浆TC、TG、LDL-C含量和AI,升高HDL-C含量和HDL-C/TC,能降低正常大鼠和高脂血症大鼠血浆和肝脏MDA含量以及肝胆固醇含量,降低高脂血症大鼠肝重、肝指数(肝重/体重),但对正常大鼠的肝重、肝指数无明显影响。 体外培养人脐静脉内皮细胞ECV-304,观察γ-亚麻酸对多聚赖氨酸损伤内皮细胞的保护作用。结果发现正常培养的ECV-304在加入损伤剂多聚赖氨酸后,细胞损伤严重,出现细胞皱缩,大多数细胞解体。细胞内乳酸脱氢酶(LDH)渗透增加,细胞培养液中丙二醛(MDA)含量增高,超氧化物歧化酶(SOD)活性降低。而与不同浓度γ-亚麻酸共孵育24h的内皮细胞在加入多聚赖氨酸后,细胞形态基本正常,大部分细胞排列规则。与只加损伤剂的内皮细胞相比,细胞培养液中LDH水平较低,MDA含量较少,SOD活性较高。这说明γ-亚麻酸对内皮细胞具有一定的保护作用。这一作用可能与γ-亚麻酸不饱和程度比较高,首先被氧化从而保护了细胞膜,减轻了多聚赖氨酸对内皮细胞的损伤程度有关。
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