论文部分内容阅读
目的：和背景肝癌是常见的致死性恶性肿瘤之一,随着分子生物学的发展和人们对肝癌分子病理机理研究的不断深入,为正在兴起的基因治疗提供了理论依据,并在很大程度上促进了人们对肝癌基因治疗的探索性研究。基因治疗的关键是将治疗基因特异性地导入靶细胞,并获得安全有效地表达。因此,提高基因的靶向性,寻找能特异性靶向结合至肝细胞表面的分子对于肝癌的基因治疗具有重要意义。肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)的高表达为肝癌的基因治疗提供了新的靶点,而半乳糖基能与ASGP-R高效特异性结合,该实验旨在研究携半乳糖基化多聚赖氨酸(G-PLL)的靶向超声造影剂联合超声辐照介导c-myc反义寡核苷酸(c-mycASODN)在小鼠肝癌组织中的转染效果。方法将G-PLL与超声造影剂SonoVue耦联构建靶向微泡,以“生物素-亲和素”系统制备c-mycASODN和靶向微泡的复合物,常规培养人肝癌细胞SMMC7721,建立SMMC7721小鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤鼠随机分为4组,每组5只,分别经尾静脉团注磷酸缓冲盐溶液(PBS)(A组)、c-mycASODN+G-PLL(B组)、c-mycASODN+SonoVue(C组)、c-mycASODN+G-PLL+SonoVue(D组),后两组分别给予1 MHz、2W/cm2、5 min的超声辐照。治疗后每隔7天测量肿瘤大小,计算抑瘤率,描绘小鼠肿瘤生长曲线。28天后处死小鼠,取肿瘤组织,以RT-PCR法和Western Blot法检测肿瘤内c-myc mRNA和c-myc蛋白的表达,观察c-myc表达随时间的变化。结果c-mycASODN+G-PLL+SonoVue+超声辐照组(D组)抑瘤率明显高于其它各组,肿瘤生长受到明显抑制(P＜0.05);肿瘤内c-myc mRNA及c-myc蛋白的表达也均低于其它组(P＜0.05)。结论利用“生物素亲和素”系统成功构建了超声微泡、G-PLL、反义寡核苷酸三者的耦联复合物,此复合物在体内血流动力作用下能成功靶向肝脏,联合超声辐照可提高基因在小鼠肝癌组织中的转染效率,实现了肝脏肿瘤治疗的三级靶向,可能成为肝癌基因治疗的有效手段之一。