背景：牵引成骨（distraction osteogenesis, DO）被认为是体内组织工程技术的最佳类型，已广泛应用于临床，矫治了四肢及常规正颌外科手术难以矫治的诸多复杂颅颌面畸形、骨缺损等。尽管如此，DO也存在某些不足之处，固定治疗周期长，牵引器长期留置体内可能导致如局部感染、牵引器或螺钉松脱、骨折、局部延迟愈合及给病人和家属带来心理负担和诸多烦恼。为此，许多学者进行了促进下颌骨牵引区新骨生成的相关研究。目的：本研究在前期研究的基础上，在不同时点通过电穿孔技术将构建的重组质粒pIRES-hBMP2-hVEGF165导入兔下颌骨牵引间隙内，观察基因转染后成骨因子在下颌骨牵引区的局部表达，探索基因导入最佳时机的理论依据。方法：选用48只6月大小、健康新西兰大白兔，随机分为四组每组12只，在全麻下行双侧下颌骨截骨，植入兔专用下颌骨牵引器，外置牵引器旋转杆，分层缝合切口。经过3d潜伏期后开始牵引，牵引速度0.8mm/d，频率1次/d，连续牵引10d后进入固定期。各组在不同阶段进行基因导入， A、B、C组分别于术后即刻（潜伏期）、术后3d（牵引开始时）、术后14d（牵引结束固定开始）在双侧牵引区注射2μg，（0.1μg/μl）重组质粒pIRES-hBMP2-hVEGF165； A、B、C三组均予电脉冲刺激（电脉冲参数：电压是200V,电容是10μF，频率是0.2Hz，平均脉冲宽度是2.7ms，单脉冲刺激，共为6个脉冲，3个脉冲更换正负极。），D组单纯牵引不行基因转染。各组分别在固定第7、14、28d处死4只实验动物，获取延长的下颌骨行组织学观察牵引区新骨生成情况，免疫组化检测BMP2、TGF-β1的表达情况，并用CMIAS系列多功能真彩色病理图像分析系统对BMP2和TGF-β1的平均光密度和积分光密度分析。结果：组织学检查发现，固定期第7天，截骨部位有软骨痂和钙化组织形成的早期桥连，并伴有软骨细胞和成纤维细胞；第14天，软骨细胞和狭长的成纤维细胞在牵引间隙在形态学上被鉴别，并且在牵引方向上生长；第28天，牵引间隙的骨碎片产生桥接，伴随着牵引间隙明显的骨和钙化组织沉积。B组与A、C、D组比较间隙内有更多的新生血管、间充质细胞和成骨细胞等成分。免疫组化显示：1、BMP-2表达于细胞胞浆中。固定期第7天，BMP-2主要表达于肉芽组织中的炎细胞（如间质细胞、单核细胞）和成纤维细胞、软骨细胞、成骨细胞、骨细胞（骨端骨细胞、骨痂骨细胞）以及周围结缔组织中。固定期第14天，BMP-2阳性染色主要在肥厚性软骨细胞和成骨细胞的细胞的细胞质中，与牵引方向排列一致新生的幼稚骨小梁表面成骨细胞、软骨细胞、骨细胞和周围结缔组织中。在固定期第28天，BMP-2阳性染色逐渐减少，主要在成骨细胞和成纤维细胞中。半定量分析发现，在固定期第7天时，四组BMP-2表达达到高峰。其他3组比较,B组(0.31±0.04，0.68±0.06)是最强的，其中有显著差异(P <0.01，P <0.05)。C组和A、D之间仍有显著性差异(P <0.05)，A与D组相比,有显著差异(P <0.05)。在固定期14天,阳性染色细胞的数量减少，B组与A、C、D之间具有显著差异(P <0.05)。BMP-2在28天的表达很弱,各组间比较无显著性差异(P>0.05)。2. TGF-β1表达各个时间点上与BMP-2密切相关。在固定期第7天，TGF-β1表达主要在成纤维细胞、骨细胞、成骨细胞和沿着截骨边缘的软骨细胞。还有大量不明确的间充质细胞阳性染色。TGF-β1的表达在固定期第14天和28天BMP-2表达相似。在第14天, TGF-β1在肥厚性软骨细胞,骨细胞和再生的成骨细胞以及间充质细胞中表达。在第28天, TGF-β1在骨痂表面成骨细胞以及新生的编织骨痂骨细胞染色仍呈阳性，而在肉芽组织中的阳性染色的细胞减少明显。TGF-β1在四组在不同时间的表达强度在表2中列出。半定量分析发现，在固定期第7天时，四组TGF-β1表达达到高峰，B组(0.37±0.07，0.90±0.06)是最强的其次是C组(0.22±0.02，0.69±0.02)和A组(0.16±0.05，0.41±0.03)。B组与其余各组间有显著差异(P <0.01，P <0.05)。在14-28天基因转染后,统计分析TGF-β1在不同组织的表达情况类似BMP-2的情况，在固定期14天,阳性染色细胞的数量减少，B组与A、C、D之间具有显著差异(P <0.05)，28天的表达很弱,各组间比较无显著性差异(P>0.05)。结论：在下颌骨牵引区局部进行基因转染能上调成骨因子BMP2、TGF-β1的表达，不同时机转染基因效果不同，在牵引期进行基因转染BMP2、TGF-β1各时间点的表达较潜伏期和固定期进行基因转染强烈，高表达的BMP2、TGF-β1可能通过一系列生物效应促进牵引间隙的新骨生成，这可能是牵引期为基因治疗最佳时机的分子机制之一。