日本血吸虫雌雄虫合抱,雌虫成熟并产卵,对宿主造成病理性损害,卵排出体外又造成疾病的再传播,而未合抱的雌虫发育不正常无法正常产卵。实验室前期利用i TRAQ蛋白质组学技术对单性感染雌虫和双性感染雌虫在感染后18、21、23和25d的差异表达蛋白进行分析,本研究对这四个时期双性感染雌虫都高表达的七个蛋白进行生物学功能初步分析,这七个蛋白分别为:Sj TCTP、Sj Annexin A13、Sj UL30、CAX72463、Sj GST、CAX70849、Sj UDP-4。利用Real-time PCR分析了这七个蛋白对应基因在日本血吸虫感染宿主7、14、18、21、25、28、35、42d虫体,感染宿主18、21、25、28、35、42d雄虫和雌虫,单性感染和双性感染18、21、23、25d雌虫体内的转录表达水平。结果发现:Sj GST(谷胱甘肽-S-转移酶的同工酶)和Sj UDP-4(葡萄糖异构酶)在血吸虫新陈代谢旺盛的时期(7d、21d)表达较高;Sj Annexin A13的表达随着血吸虫的生长发育逐渐上升;其它基因皆25d表达最高。通过它们在雌雄虫体内的表达情况分析发现:这七个蛋白在雄虫体内的转录水平基本保持稳定,它们在雌虫体内的表达随着雌虫的生长发育变化。在转录水平上,大部分目的蛋白在双性感染雌虫体内的表达高于单性感染雌虫,这与我们前期差异蛋白质组学结果相符。为了研究这些蛋白在血吸虫体内的生物学功能,利用短期干扰筛选到每个目的基因干扰效果良好的si RNA分子,通过尾静脉定期注射的方式对小鼠体内的血吸虫进行目的基因转录水平上的长期干扰。收集受干扰虫体并计数,部分虫体利用扫描电镜和透射电镜观察其形态学变化,同时统计小鼠肝脏荷卵数和卵胚孵化情况,通过分析血吸虫存活率、血吸虫产卵能力、卵胚孵化能力了解相应蛋白的生物学功能。结果发现Sj TCTP基因的干扰严重影响血吸虫的存活(减虫率为55.9%),严重影响所产卵胚的孵化能力(69.5%);Sj Annexin A13干扰严重影响雌虫产卵能力(每只雌虫肝卵荷贡献率下降82.8%);电镜分析发现基因表达被干扰都引起了虫体形态学方面的变化,尤其是CAX70849相对应基因表达被干扰引起虫体体表形成缝隙和大的空洞甚至溃烂。本研究还评估了两个在单性感染雌虫中高表达的日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因(Sj ELAV-like 1和Sj ELAV-like 2)的免疫保护功能。首先克隆、表达并纯化融合蛋白,将两个融合蛋白分别与206佐剂混合免疫小鼠,每隔两周免疫一次,共免疫三次,每次免疫后两周眼眶采血,收集血清用ELISA检测抗体变化水平。三免后两周攻虫,42d剖杀小鼠收集虫体并计数,收集肝脏并分别计算肝脏荷卵数同时进行肝卵孵化,计算减卵率和减孵化率。r Sj ELAV-like 1免疫后获得减虫率为17.81%,减卵率为44.52%,减孵化率为-20.38%,r Sj ELAV-like 2免疫获得减虫率36.03%,减卵率51.34%,减孵化率46.83%,差异均显著。ELISA检测发现在第1次免疫后r Sj ELAV-like 2的特异性Ig G抗体已经出现,第二次免疫后迅速上升,第三次免疫后达到最高水平。佐剂组和空白组变化不明显。本研究通过分析血吸虫雌虫生殖发育相关蛋白在血吸虫发育不同时间、不同性别、不同感染状态虫体内的转录表达情况,以及干扰其表达对血吸虫生长生殖的影响,对其生物学功能进行了初步分析,为今后进一步研究和利用这些基因防控血吸虫病奠定了理论基础。也通过免疫保护效果评价发现r Sj ELAV-like 2更适合作为日本血吸虫病的疫苗候选分子,为血吸虫病的预防研究提供了一定的数据基础。