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目的:本实验旨在通过体内、体外两种途径给予青春期大鼠外源性雌激素,初步探讨在Sertoli细胞分化和成熟阶段,雌激素对Sertoli细胞FasL表达以及血-睾屏障的影响,进一步讨论影响血-睾屏障的相关因素及其可能机制。
方法:(1)Sertoli细胞FasL的表达:①在培养液中加入雌二醇(浓度4×10-6M),分别在Sertoli细胞培养24小时、48小时,用间接免疫荧光方法检测Sertoli细胞 FasL表达的变化;②新生SD大鼠(出生=第0天),自出生第二天始隔日皮下注射二乙烯雌酚(DES),浓度10 mg/20ml,至第十二天为止,与母鼠共同喂养至第18天和第25天两个时间点取材。应用间接免疫荧光方法检测Sertoli细胞 FasL表达的变化。(2)新生SD大鼠自出生第二天始隔日皮下注射DES,与母鼠共同喂养至第18天和第25天取出双侧睾丸,切成1mm3小块,置入3% 硝酸镧-戊二醛-二甲砷酸钠缓冲液中前固定,利用重金属镧不能穿越正常血-睾屏障的特点,运用睾丸组织硝酸镧块染法在电镜下观察血-睾屏障结构的变化。(3)新生SD大鼠自出生第二天始隔日皮下注射DES,与母鼠共同喂养至第18天和第25天两个时间点心脏取血,ELISA方法检测血液中TNFα浓度的变化。
结果:给予外源性雌激素后使:(1)Sertoli细胞FasL表达增强,并出现FasL分布区域的改变。(2)在18天实验组,电镜下显示镧大量透过血-睾屏障,到达生精上皮全层。(3)血液中TNFα浓度降低。
结论:(1)雌激素可以使Sertoli细胞内FasL的表达量和分布区域发生改变;(2)雌激素可以影响血-睾屏障的结构与功能(硝酸镧轨迹,TNFα浓度);(3)FasL可能在血-睾屏障结构与功能改变后的机体自身修复中起重要作用,并激活免疫调节功能,因此它可能与睾丸组织免疫豁免密切相关。