论文部分内容阅读
为探讨脑红蛋白在成年牦牛与黄牛不同组织细胞中的分布特征及表达差异性，选择健康成年牦牛与黄牛各8头，利用免疫组织化学染色SP法对其神经系统大脑、小脑、海马、纹状体、延髓、嗅球以及外周神经节；内分泌系统脑垂体、肾上腺、松果体以及甲状腺；生殖系统睾丸、卵巢以及输卵管；消化系统皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、胰腺以及心肌、骨骼肌、肝脏、脾脏、肺脏，肾脏等器官组织中NGB的表达与分布进行了比较研究。利用实时荧光定量PCR技术对其大脑皮质、小脑皮质、海马、延髓、纹状体、嗅球、肾上腺、皱胃、十二指肠等部位组织中NGB的表达量进行了测定。具体研究结果如下：1.免疫组织化学结果1.1脑红蛋白在成年牦牛与黄牛神经系统的分布牦牛大脑皮质中，NGB阳性细胞广泛分布于皮质第I~VI层且数量众多，阳性反应强度明显高于小脑皮质、海马、纹状体等区域，大脑髓质中亦可见散在分布的NGB阳性细胞。黄牛大脑中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似，皮质中NGB阳性反应强度高于小脑皮质、海马、纹状体等区域。NGB阳性细胞在黄牛大脑中的阳性反应强度整体弱于牦牛。牦牛小脑皮质中，NGB阳性细胞在浦肯野氏细胞层中的反应强度较高，在分子层和颗粒层中的反应强度较弱。黄牛小脑中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似，但皮质中NGB阳性反应强度整体弱于牦牛。牦牛海马各区中，NGB阳性细胞多为椎体细胞，阳性反应部位主要存在于细胞突起中，强度较弱。黄牛海马不同区域中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似，但反应强度整体弱于牦牛。牦牛大脑纹状体中，NGB阳性细胞广泛分布于尾状核区域，阳性反应强度高于海马、延髓、嗅球等区域，但弱于大脑皮质、小脑皮质等区域。黄牛纹状体中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似，尾状核区域中NGB阳性细胞反应强度高于海马、延髓、嗅球等区域。NGB阳性细胞在黄牛纹状体中的反应强度整体弱于牦牛。牦牛延髓中，NGB阳性细胞主要分布于灰质，白质中可见散在分布的NGB阳性细胞。黄牛延髓中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似，但反应强度整体弱于牦牛。牦牛嗅球的僧帽细胞层中，NGB阳性细胞染色明显，胞体大，免疫阳性反应强度较延髓弱，但略强于海马等区域。黄牛嗅球中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似，僧帽细胞层中NGB阳性细胞反应强度弱于延髓等区域，但略高于海马等区域。NGB阳性细胞在黄牛嗅球中的反应强度整体弱于牦牛。牦牛周围神经系统中，NGB阳性细胞主要分布于外周神经节和神经丛，大多数为一些散在的神经细胞，数量较少。黄牛周围神经系统中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似，但反应强度整体弱于牦牛。1.2脑红蛋白在成年牦牛与黄牛内分泌系统的分布牦牛肾上腺中，NGB阳性细胞在皮质和髓质部均有分布。黄牛肾上腺中NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似。NGB阳性细胞在牦牛与黄牛肾上腺中的反应强度未见有明显差异。牦牛腺垂体中，NGB阳性细胞主要为嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞。黄牛腺垂体中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似。NGB阳性细胞在牦牛与黄牛腺垂体中的反应强度未见有明显差异。利用免疫组化方法对成年牦牛与黄牛松果体、甲状腺等器官组织进行观察，均未发现有NGB阳性细胞。1.3脑红蛋白在成年牦牛与黄牛生殖系统的分布牦牛睾丸中， NGB阳性反应在精原细胞和初级精母细胞中着色最深，其他精母细胞着色稍浅，在部分间质细胞中也有较浅着色。黄牛睾丸中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似。NGB阳性细胞在牦牛与黄牛睾丸中的反应强度未见有明显差异。利用免疫组化方法对成年牦牛与黄牛雌性生殖系统中卵巢及输卵管等器官组织进行观察，均未发现有NGB阳性细胞。1.4脑红蛋白在成年牦牛与黄牛消化系统的分布牦牛皱胃中，胃底腺细胞呈NGB阳性表达。黄牛皱胃中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似。NGB阳性细胞在牦牛与黄牛皱胃中的反应强度未见有明显差异。牦牛十二指肠中，肠腺细胞呈NGB阳性表达。黄牛十二指肠中，NGB阳性细胞的分布与定位情况与牦牛类似。NGB阳性细胞在牦牛与黄牛十二指肠中的反应强度未见有明显差异。利用免疫组化方法对成年牦牛与黄牛空肠、回肠、盲肠、结肠、胰腺等器官组织进行观察，均未发现有NGB阳性细胞。1.5脑红蛋白在成年牦牛与黄牛其他组织细胞中的分布利用免疫组化方法对成年牦牛与黄牛心肌、骨骼肌、肝脏、脾脏、肺脏，肾脏等器官组织进行观察，均未发现有NGB阳性细胞。2．荧光定量实验结果本实验利用实时荧光定量PCR技术对NGB在成年牦牛与黄牛部分组织细胞中的定量关系进行了检测，结果显示：牦牛体内，NGB基因在大脑皮质、小脑皮质、延髓、纹状体、嗅球、肾上腺、皱胃、十二指肠组织中表达量的2-△△Ct值分别是262.69、137.00、3.43、7.65、2.14、7.82、16.26、30.23，均高于海马，分别为海马表达量的262.69倍、137.00倍、3.43倍、7.65倍、2.14倍、7.82倍、16.26倍、30.23倍。黄牛体内，NGB基因在大脑皮质、小脑皮质、延髓、纹状体、嗅球、肾上腺、皱胃、十二指肠组织中表达量的2-△△Ct值分别是165.53、136.29、1.53、1.98、2.19、4.18、12.91、20.29，也均高于海马，分别是海马表达量的165.53倍、136.29倍、1.53倍、1.98倍、2.19倍、4.18倍、12.91倍、20.29倍。