乙型肝炎病毒基因突变检测与分析平台研发

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乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的一种严重危害全球人类健康的传染性疾病,引起多器官损坏,可能导致肝硬化、肝癌等慢性疾病的发生。研究发现,HBV基因组具有多基因型和高度突变性,基因突变与HBV病毒的耐药性和其导致的慢性疾病的发生有着密切联系,因此,对病患的HBV基因组进行基因分型和基因突变分析,进而阐述HBV基因组中突变类型的信息实质,破译基因组不同位点与耐药性和其他肝脏疾病的相关性是进行相关疾病个体化诊断和个体化治疗的基本前提。然而,我国目前还缺乏针对HBV病毒基因组的方便实用的计算机软件及其分析系统,国际上已有的序列比对算法对HBV基因序列分析的准确性和效率不高;采用非计算机技术来进行基因突变比对和基因型分析工作效率极低;国外相关系统不仅复杂,且许多标准参考序列并不与中国人群基因组完全相符,从而会对基因序列的准确分析产生较大影响。因此,本课题着眼于开发适用于我国境内乙型肝炎病毒基因分型、基因突变与病毒感染性疾病相关的软件分析平台,为相关疾病的个体化治疗提供支持。根据以上目的,本课题开发的HBV Drug Guide系统是在分子生物学的有关原理提供理论基础和生物信息学的迅猛发展提供技术途径的背景下,以NCBI数据库为基础,结合Clustal算法和Blast算法,采用分类比对的思想等,针对乙肝病毒P基因和BCP-PreC/C基因突变进行分析和指导个体化治疗的分析系统,支持离线使用,能够实现一次性准确判定HBV基因突变情况,完成耐药性判断、HBV突变与肝脏功能、肝癌进程分析。实验一:乙肝个体化治疗分析系统(HBV drug guide)设计结合分子生物学和生物信息学理论与技术,通过生物信息学分析方法,我们分析了HBV drug guide系统开发的可行性、创新性以及所需要的生物信息学理论与技术。实验二:乙肝个体化治疗分析系统(HBV drug guide)开发在实验一的研究基础上,首先分析了HBV Drug Guide的总体目标及各功能模块设计,然后以VC++. net为开发平台,使用模块化编程思想,构建了针对中国大陆流行的A~D四种HBV基因型分析的HBV Drug Guide系统。实验三:基于HBV drug guide软件测试临床乙型肝炎患者收集临床乙肝病毒感染患者的外周血血清,设计与合成P基因区和PreC/C基因区的核酸扩增引物,提取DNA,PCR扩增和测序,利用我们设计与开发的HBV DrugGuide系统进行乙型肝炎病毒基因突变与疾病关联分析,同时与Clustal X、Sequencescanner等软件比较,验证HBV Drug Guide的准确性和可用性。结果显示:该软件能够实现常规测序结果查看、QV值计算、精确定位已知基因突变、新发基因突变的功能,并根据基因突变情况做出耐药情况判断、乙肝病程预测。为乙肝病毒感染性疾病的研究提供了强有力的理论支撑和技术指导,为乙型肝炎病毒基因突变检测与分析提供了实用的临床诊断平台。
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