论文部分内容阅读
目的:探讨 Smad3 抑制剂(specific inhibitor of Smad3,SIS3)抑制 TGF-β 1/Smad3 信号通路,对大鼠宫腔粘连的影响及与转化生长因子-β 1(transforming growth factor-β 1,TGF-β 1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的关系,并分析以上三因子之间的相关性,探讨TGF-β 1/Smad3信号通路与上述三因子的相互关系。方法:(1)选择大鼠宫腔粘连造模方法:选取18只8-12周龄健康雌性未交配的SD大鼠,随机平均分为三组,一组采用无水乙醇灌注宫腔造模,另一组用机械损伤+脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)感染法造模,对照组(宫腔注射生理盐水作为对照);造模后2周处死大鼠,取出子宫组织,进行HE染色和Masson染色,分别评估子宫内膜腺体数量和间质的纤维化程度,计算子宫内膜纤维化半定量评分,根据结果选择最佳的造模方案,进入后续研究。(2)分组:选定造模方案后将30只SD大鼠随机平均分为对照组、模型组(建立宫腔粘连模型)和干预组(相同方法造模后给予Smad3抑制剂),2周后收集大鼠子宫组织,采用HE和Masson染色检测子宫内膜的腺体数量和纤维化程度,计算子宫内膜的纤维化半定量评分;采用反转录一聚合酶链反应(Reverse transcription PCR,RT-PCR)法和 Western-blot 法检测各组大鼠 TGF-β 1、CTGF及MMP-9mRNA及蛋白的相对表达量,并与粘连程度进行相关性分析,且对三因子的表达也进行相关性分析。结果:(1)对照组、无水乙醇宫腔灌注组、机械损伤+LPS感染组大鼠子宫内膜纤维化评分分别为0分、5.7±0.82分、6.8±0.75分;组间比较有显著性差异(P<0.001);无水乙醇组、机械损伤+LPS感染组宫腔粘连评分均高于对照组(P<0.001);机械损伤+LPS感染组宫腔粘连评分高于无水乙醇组,但无统计学意义(P>0.05);但是无水乙醇造模后大鼠腹腔粘连严重,子宫与腹腔组织粘连紧密,不利于后续实验组织标本的收取,故而采用机械损伤+LPS感染法建立大鼠宫腔粘连模型。(2)后续实验中从对照组、干预组到模型组,子宫内膜腺体数量逐渐减少,间质胶原纤维含量逐渐增加;三组子宫内膜纤维化评分分别为:0分、4.1±0.99分、7.0±0.82分,两两相比,差异均有统计学意义(P<0.001)。(3)模型组TGF-β 1、CTGF、MMP-9mRNA和蛋白表达量均高于对照组(P<0.05);模型组CTGF mRNA和蛋白表达量均高于干预组(P<0.05),但两组TGF-β 1、MMP-9mRNA和蛋白表达量无显著差异(P>0.05);干预组TGF-β 1、CTGFmRNA和蛋白表达量均高于对照组(P<0.05);两组MMP-9mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。(4)干预组CTGF mRNA及蛋白表达水平与子宫内膜纤维化评分呈正相关,而TGF-β 1、MMP-9则无明显相关性。(5)模型组TGF-β1、CTGF mRNA及蛋白表达水平与子宫内膜纤维化评分均呈正相关,而MMP-9则无明显相关性。(6)TGF-β 1与CTGFmRNA和蛋白在干预组无明显相关性,但在模型组呈正相关。无论在干预组还是模型组,TGF-β 1、CTGF与MMP-9在mRNA和蛋白水平均无明显相关性。结论:(1)抑制TGF-β 1/Smad3通路可减轻子宫内膜受损后宫腔粘连程度。(2)TGF-β 1、CTGF、MMP-9可能参宫腔粘连的发生。(3)TGF-β 1、CTGF与宫腔粘连的程度呈正相关。(4)CTGF可能为宫腔粘连的潜在分子标记物。