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金黄色葡萄球菌是污染食物,引起食物中毒的主要病原菌之一;也是造成临床感染的常见微生物。因此,对金黄色葡萄球菌的检测技术的开发具有较高的应用价值。环介恒温扩增方法（LAMP）扩增特异性核酸序列,具有高特异性、高灵敏性、简便、快速和低成本的特点,已在诸多领域广泛应用。本文对LAMP用于检测金黄色葡萄球菌的技术方法、检测效果进行了研究。本文确定了金黄色葡萄球菌的培养方法、菌体计数方法、染色体DNA提取及定量方法,并制备了菌裂解液和DNA提取液,分别作为LAMP检测的模板。选择了金黄色葡萄球菌的nuc基因为LAMP方法检测的靶序列,并针对nuc基因设计了两套不同的特异性LAMP引物。优化了LAMP反应体系和反应条件,确定了25μL的LAMP反应体系为:2.5μL 10×buffer、1.2 mM dNTP、0.2μM外引F3和B3、1.6μM内引FIP和BIP、0.8M甜菜碱、4mM MgCl2、1μL Bst DNA聚合酶、2μL模板。第一套LAMP引物的反应温度为65℃,反应时间45min;第二套LAMP引物的反应温度为62℃,反应时间45min。利用LAMP引物,分别以金黄色葡萄球菌ATCC 25923、大肠杆菌top10和枯草芽孢杆菌168染色体DNA提取物为模板,同时进行了LAMP扩增,只有金黄色葡萄球菌能够扩增出LAMP反应特有的梯形条带,进一步证明了nuc基因的特异性,是检测金黄色葡萄球菌的可靠靶序列。分别以金黄色葡萄球菌的菌裂解液和DNA提取液的稀释液作为检测模板,用两套LAMP引物进行了LAMP和普通PCR扩增。结果显示,第一套LAMP引物的最低检测限为0.36pg DNA,或880 CFU;第二套LAMP引物的最低检测限为32fg DNA,或53 CFU;普通PCR方法的最低检测限为0.32-0.36pg DNA,或530-880CFU。第二套引物的设计比第一套引物更加符合LAMP引物设计原则,所以具有更好的检测灵敏度。在优化后的LAMP反应体系和反应条件下,运用设计的LAMP引物,均能扩增金黄色葡萄球菌nuc基因序列,具有比较理想的特异性和灵敏度,初步证明LAMP方法能够用于快速、准确的检测金黄色葡萄球菌。