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目的:研究紫苏叶提取物对内皮细胞生长和功能的影响,为中药防治心脑血管疾病提供理论依据。 方法:采用水提醇沉、乙酸乙酯萃取法制备紫苏叶注射液。在鸡胚成纤维细胞体系中测定紫苏叶注射液的最大安全浓度。显微操作组织贴块法分离培养 SD大鼠腹主动脉血管内皮细胞,待细胞融合成单层后,进行传代培养,免疫细胞化学方法进行血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原(von Willebrand factor,vWF)鉴定。将不同浓度紫苏叶注射液与内皮细胞共培养,不加紫苏叶注射液培养组为对照组。采用MTT比色法检测紫苏叶注射液对内皮细胞增殖的影响;测定紫苏叶注射液与内皮细胞共培养后上清液中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量观察紫苏叶注射液对内皮细胞功能的影响。 结果:实验结果如下。 ①紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞体系中的安全浓度为488.281μg/mL。 ②显微操作组织贴块法能更有效地培养血管内皮细胞。血管植块培养72h后开始有内皮细胞从组织块周围移出,12d后开始融合成单层,对细胞进行vWF染色,细胞阳性率为97%。 ③一定浓度范围内紫苏叶注射液对血管内皮细胞增殖有促进作用,且呈量效关系。6.25、12.5、25、50、100、200、400、800μg/mL(分别用I~Ⅷ组表示)紫苏叶注射液与内皮细胞共培养24h后,I~Ⅶ组细胞 OD值均大于对照组,该浓度范围内注射液能促进血管内皮细胞增殖(P<0.05),增殖率随给药物浓度的增加而增高,呈现量效关系。Ⅷ组细胞 OD值小于对照组,此时紫苏叶注射液对内皮细胞增殖呈抑制作用。 ④一定浓度范围内浓度紫苏叶注射液能促进血管内皮细胞 NO的分泌量。与对照组相比,I~Ⅶ组均能显著提高 NO分泌量(P<0.05)。第Ⅶ组(400μg/mL浓度组)效果最明显,NO含量可提高到36.11±5.98μmol/L。第Ⅷ组NO的浓度小于对照组,该浓度紫苏叶注射液对内皮细胞的分泌功能呈抑制作用。 ⑤不同浓度紫苏叶注射液对血管内皮细胞的SOD、MDA影响不同。I~Ⅶ组均能显著提高内皮细胞 SOD活力(P<0.05),减轻细胞的脂质过氧化程度。第Ⅶ组(400μg/mL浓度组)效果最明显,SOD浓度为34.49±1.56 U/mL,MDA浓度降低至31.91±58.65 nmol/mL。第Ⅷ组SOD的浓度小于对照组,MDA浓度大于对照组。 结论:紫苏叶注射液通过促进血管内皮细胞分泌 NO、提高细胞 SOD活力和减轻细胞脂质过氧化而促进血管内皮细胞生长。