【摘 要】
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目的研究前列腺癌来源的外泌体是否通过上调趋化因子配体12(CXCL12)的特异性受体4(CXCR4)的表达从而促进MDSCs向肿瘤微环境的聚集,并探索其可能的机制。方法超高速离心法提取外泌体,电镜观察外泌体形态,WB检测表面标志蛋白。流式细胞术检测荷瘤小鼠不同时间肿瘤组织中MDSCs比例;正常小鼠尾静脉注射外泌体后,骨髓、脾脏中MDSCs的比例变化情况;以及荷瘤小鼠尾静脉分别注射PBS、外泌体、外
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目的研究前列腺癌来源的外泌体是否通过上调趋化因子配体12(CXCL12)的特异性受体4(CXCR4)的表达从而促进MDSCs向肿瘤微环境的聚集,并探索其可能的机制。方法超高速离心法提取外泌体,电镜观察外泌体形态,WB检测表面标志蛋白。流式细胞术检测荷瘤小鼠不同时间肿瘤组织中MDSCs比例;正常小鼠尾静脉注射外泌体后,骨髓、脾脏中MDSCs的比例变化情况;以及荷瘤小鼠尾静脉分别注射PBS、外泌体、外泌体+AMD3100(CXCR4抑制剂)、AMD3100后,每组肿瘤组织中MDSCs的比例变化。Transwell趋化实验验证以上4种方法处理MDSCs后的迁移能力。WB检测外泌体共培养后MDSCs中CXCR4的表达情况。小鼠尾静脉注射外泌体后,流式细胞术检测骨髓、脾脏中MDSCs细胞群的CXCR4阳性表达情况。WB检测PBS、外泌体、外泌体+C29(TLR2抑制剂)、C29 4种方法处理MDSCs后,TLR2、p65、Pp65、CXCR4的蛋白表达情况。结果电镜及WB均表明提取物质为外泌体。MDSCs在脾脏及肿瘤组织中的比例随着荷瘤时间延长而升高。小鼠尾静脉注射外泌体后,MDSCs在骨髓、脾脏及肿瘤组织中的比例较对照组明显增加(p<0.05),并且在肿瘤组织中由外泌体介导的MDSCs聚集效应能够被AMD3100显著抑制,transwell实验结果与之相同。体内外实验均显示,外泌体处理MDSCs后CXCR4的表达较对照组明显上调(p<0.05)。WB结果显示,外泌体培养后Pp65和TLR2在MDSCs中的表达较PBS组均显著增加(p<0.05),而C29抑制TLR2后,Pp65和CXCR4的表达明显减少(p<0.05)。结论前列腺癌来源的外泌体可以通过激活TLR2/NF-KB信号通路上调MDSCs中CXCR4的表达,然后通过CXCR4-CXCL12信号轴促进MDSCs向肿瘤微环境的迁移。
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