论文部分内容阅读
乙型肝炎病毒(HBV,简称乙肝病毒)能引起人类感染急性和慢性乙肝疾病,其病毒感染对全球的公共健康是一个巨大的威胁。虽然乙肝疫苗的应用使乙肝病毒的传播得到了遏制,但乙肝病毒的慢性感染依旧难以治愈。乙肝病毒在肝细胞中的表达和复制是受一系列宿主细胞因子调节的,而乙肝病毒可以通过调控这些细胞因子来增强自身的病毒增殖。细胞miRNA是高度保守的非编码RNA,它参与了多种生理过程和疾病进程,目前很多文献报道miRNA在病毒与宿主细胞的交互作用中有重要作用。在本研究中,我们报道了通过转染化学合成的miR-26b模拟物可以抑制乙肝病毒的抗原HBeAg与HBsAg表达、前基因组RNA (pgRNA)转录和衣壳DNA复制,而通过反义抑制子来降低内源性的miR-26b表达后可以增强乙肝病毒的基因表达和DNA复制。过量表达和敲除实验显示miR-26b可以显著降低乙肝病毒的增强子／启动子的活性,证明miR-26b可以通过调节病毒转录水平来实现抑制乙肝病毒。然后,我们鉴定了一系列潜在的miR-26b宿主靶标基因,它们可能与HBV复制的调控相关,其中主要有含半胱氨酸和组氨酸丰富域蛋白1(CHORDCl)。通过miR-26b与CHORDCl信使RNA的3’UTR互补序列特异性地碱基配对,miR-26b可以明显降低CHORDCl的蛋白表达。过表达和敲除实验显示CHORDCl可以通过促进增强子／启动子活性来增加乙肝病毒病毒抗原表达、pgRNA转录和DNA复制。我们同时还发现,乙肝病毒的感染可以使人外周血单核细胞和肝细胞中的miR-26b的表达水平明显下调。另外,我们还证实了miR-26a,另外一条成熟的miR-26家族miRNA,也能降低CHORDCl蛋白的表达,从而也能抑制乙肝病毒的转录和复制。我们的实验结果表明,在肝癌细胞中miR-26b可以下调包括CHORDCl在内的多个靶标基因的表达,降低乙肝病毒的增强子／启动子活性,从而抑制病毒转录、蛋白表达和病毒复制。乙肝病毒感染导致的miR-26b表达下调,表明乙肝病毒可以通过抑制miR-26b的表达水平促进自身的病毒增值。同时,由于miR-26b具有潜在抑癌作用,乙肝病毒诱导的miR-26b水平下降可能在相关肝癌的发生也有重要的作用。我们的发现为miR-26b用于潜在的临床治疗乙肝病毒感染的应用提供实验依据。