本研究以从宁夏银川广夏葡萄酿酒有限公司分离筛选鉴定出的28株酒酒球菌和葡萄酒学院保藏的23株优良酒酒球菌为试材,构建适合酒酒球菌的RAPD-PCR反应体系,采用分离群体分析法(Bulked segregant Analysis,BSA),对酒酒球菌抗酒精连锁基因进行了RAPD标记,为目的基因克隆以及筛选抗酒精菌株提供理论依据。主要研究结果如下:1.经本实验研究分析,优良酒酒球菌的抗酒精能力应在12%(体积分数)以上。2.从28株供试菌株中筛选出不抗酒精的8株菌株,编号为NX-1a、NX-2b、NX-1c、NX-3e、NX-3f、NX-1g、NX-2g、NX-1h。其余20株对酒精都有良好的抗性。3.通过对TaqE、Mg2+、dNTP、模板DNA、Primer不同浓度的优化试验以及对PCR反应程序的筛选,建立了适合本实验的RAPD-PCR扩增体系,具体为1.0UTaq酶、160μmol/L dNTP、0.4μmol/L随机引物、3.0mmol/LMg2+、10ng的DNA模板。扩增程序为:94℃变性300S,一个循环;94℃变性60S;36℃退火60S;72℃延伸90S,45个循环;72℃延伸300S,一个循环。4.选取耐酒精及酒精敏感菌株各5株,分别将其DNA等量混合建立抗酒精基因池和酒精敏性基因池,依据BSA法,通过RAPD实验,从45个10碱基随机引物中筛选出了一个在两池间扩增出差异条带的引物S90。在单菌株DNA中进行RAPD实验,证明了该引物扩增出的特异性片段S90-750是一个与酒酒球菌抗酒精基因相连锁的RAPD标记。本实验为进一步开展酒酒球菌抗酒精分子标记辅助选择及抗酒精基因的克隆和定位奠定了基础。