DNA结合蛋白是指能与单链的或双链的DNA的特异性的或非特异性的序列结合的蛋白质,包括组蛋白、转录因子、DNA聚合酶、RNA聚合酶、’单链结合蛋白、解链酶、连接酶、限制性内切酶以及端粒酶等。DNA结合蛋白结合到DNA的状况改变会导致染色体发生一系列的变化,这种变化在DNA复制、重组、转录、链裂解等过程中都起到关键的作用。冻害是农业气象灾害的一种。冻害是农业气象灾害的一种,常发生的有越冬作物冻害、果树冻害和经济林木冻害等多种形式。冻害对相叶橘生产威胁很大,如美国的柑橘生产和中国的柑橘生产常因冻害而遭受巨大损失。金柑是一种重要的常绿的柑橘栽培品种,具有很好的抗寒能力及对某些病虫的抗性,是筛选抗寒基因的重要基因库,以及研究植物抗寒机制的良好试材。本项目以抗寒能力显著的金柑为主要试验材料建立抗冻实验模型,通过富集、纯化DNA结合蛋白,再应用双向电泳、质谱等技术系统分析金柑响应低温的DNA结合蛋白,探讨金柑的抗冻过程的转录调控机理。取得研究结果如下：挑选生长健壮、粗度比较相近的2年生金柑(Fortunella margarita (Lour.) Swingle)苗用营养钵栽植；所有材料先进行25℃条件平衡；材料平衡后,随机选取部分苗移入控温室内在4℃条件下冷驯化2周,剩余部分继续25℃条件培养；造模时全部金柑苗用棉絮包裹营养钵及根颈,进行-10℃冰冻处理60min；以冷驯化后冰冻处理未表现冻害的金柑为抗冻组,以未冷驯化后冰冻处理表现冻害的金柑为对照组建立金柑抗冻实验模型,为后续试验的材料处理奠定了基础。测定了金柑抗冻实验模型下的生理生化指标,发现冷驯化能有效提高金柑叶片中可溶性蛋白、可溶性糖和脯氨酸含量,在冻害的过程中可溶性蛋白、可溶性糖和脯氨酸也会迅速增加,这可能是金柑具有很强的抗寒能力的原因之一。并且发现SOD、CAT和POD三种酶互相协调一致,才能使自由基维持在一个较低的水平,从而降低自由基对膜的损伤,增强植物的抗逆性。三种抗氧化酶协调清除氧自由基可能存在以下数学模型的关系：N=X—b×X×Y×Z1—c×X×Y×Z2(其中：N：能导致膜脂过氧化产生MDA的氧自由基；X：实测植物体内的氧自由基含量；Y：实测植物体内SOD酶活性；Z1：实测植物体内CAT酶活性；Z2：实测植物体内POD酶活性。)以微晶纤维素为载体,通过DNA单链片段中的磷酸基团与纤维素膜表面的羟基形成磷酸二酯键将DNA固定于微晶纤维素上,再利用复性技术将固定的DNA双链化,得到了双链DNA层析配体。应用双链DNA层析配体制备了金柑叶片DNA结合蛋白,并用DNA结合蛋白与纯化的基因组DNA进行了染色质的重建,结果表明DNA-纤维素层析制备的DNA结合蛋白可以与基因组DNA重建染色质。应用SDS-PAGE分离DNA结合蛋白,然后应用LC-MS-MS质谱分析了金柑叶片DNA结合蛋白获得2062个肽段信息。对2062个肽段进行了生物信息学分析,从中鉴别出28个同源蛋白；对未能匹配已知蛋白的肽段进行分析,发现其中一些肽段具有转录因子的结构域特征。比较了冰冻模型下不同处理的金柑叶片中DNA结合蛋白,发现不同处理的金柑叶片表达的DNA结合蛋白种类和数量存在差异。也发现DNA结合蛋白存在甲硫氨酸氧化的现象,而且不同处理的金柑叶片DNA结合蛋白甲硫氨酸氧化程度存在差异。这提示甲硫氨酸的氧化可能也是一种转录调控的方式。