老年性痴呆（Alzheimersdisease，AD）是一种渐进性神经退行性疾病，其病理特征是渐进性的老年斑沉积，神经突触丢失和神经纤维缠结，临床表现为记忆功能衰减及识别能力障碍，同时伴有各种神经症状和行为障碍。在老年人群，具有非常高的发病率，目前还没有特异性治疗药物。近年来AD的发病机理和药物研究方面都有突破性进展，尤其是制备针对β淀粉样蛋白（amyloidbetaprotein，Aβ）特异性抗体药物成为AD治疗极具价值的途径。 噬菌体展示技术（phagedisplay）为抗体制备开创了一条简便、快速的基因工程抗体制备方法。噬菌体抗体是在噬菌体表面表达抗体分子的抗原结合片段（Antigenbindingfragment，Fab）或单链抗体（singlechainfragmentvariable，scFv），单链抗体具有分子量小，免疫原性低，穿透力强，定位迅速，易于基因工程制备和改造等优点。通过构建和筛选人源性天然噬菌体抗体库，得到Aβ寡聚体特异性人源性单链抗体，可直接应用于人AD的治疗。 利用噬菌体展示技术构建人源性天然抗体库，以可溶性Aβ1-42寡聚体对抗体库进行筛选获得针对低分子量Aβ1—42寡聚体的特异性单链抗体。分离10个健康人外周血淋巴细胞，提取总RNA，RT-PCR法得到cDNA链，以cDNA链为模板扩增得到全套人抗体VH和VL基因，经过重叠延伸PCR将VH和VL连接得到scFv片段，将scFv片段酶切后克隆至pCANTAB5E噬菌体载体，电转化TG1感受态菌，经辅助噬菌体M13K07拯救，获得库容为2.5×109单链抗体库。以可溶性Aβ1—42寡聚体为抗原，对抗体库进行四轮筛选，ELISA法筛选特异性识别Aβ1-42寡聚体的阳性克隆，将筛选到的阳性克隆B19转化至E．coliHB2151，诱导表达可溶性scFv。SDS—PAGE及WesternBlot分析结果显示可溶性scFv获得了正确表达，且能够与Aβ1-42三聚体及纤维特异性结合，可溶性scFv与Aβ1-42寡聚体的亲和常数为9×l06mol/L。将单链抗体的重链和轻链可变区基因克隆入原核表达载体pComb3C/cFab中，转化TOP10感受态，诱导表达了重组抗体B19-Fab。SDS—PAGE及WesternBlot分析结果显示，重组抗体B19-Fab得到了正确的表达。ELISA结果显示，重组抗体B19-Fab仍然保持对Aβ1-42寡聚体特异性结合活性。对单链抗体亲和力成熟进行的初步研究为后续的打下了良好的基础。本实验中获得的Aβ1-42寡聚体特异性单链抗体为老年性痴呆症（AD）的临床治疗研究奠定了基础。