近年来,由于中药注射剂(TCMI)不良反应报道数量的明显增多及其严重不良反应造成的显著危害,TCMI不良反应问题已成为国内医药界关注的焦点之一。速发型超敏反应又是不良反应中最为复杂和关键的问题。速发型超敏反应包括Ⅰ型过敏反应和类过敏反应。在临床过敏反应中,类过敏反应的发生率约占过敏反应总例数的77%。如何建立准确快速的类过敏反应检测体系是当前致敏性研究需要解决的重大问题之一。类过敏反应是一种临床常见的速发型超敏反应。类过敏反应是通过直接激活肥大细胞(MC)/嗜碱性粒细胞(Basophil)或直接作用于补体系统,使靶细胞脱颗粒释放过敏介质,从而引发局部或系统性的过敏症状。在本研究中,采用大鼠、犬等实验动物进行补体激活相关类过敏机制的研究,采用小鼠皮肤血管渗透性实验进行直接刺激肥大细胞引起类过敏反应的机制研究。研究内容可分为4部分。1.大鼠类过敏检测模型的优化目的：通过敏感指标的研究分析和大鼠种类的选择,优化大鼠类过敏检测动物模型。方法：比较BN大鼠和Wistar大鼠对类过敏反应的敏感性；并在血液学指标组胺、IgE等的基础上,增加补体通路指标成分Bb和C4d的检测,以判断补体激活的具体通路。同时应用优化的大鼠模型,对10种中药注射剂、5种单体和2种辅料进行筛选。结果：与Wistar大鼠相比,BN大鼠血压和补体变化明显。筛选的药物当中,双黄连注射剂可出现大鼠MAP下降、组胺升高、IgE不变等情况。吐温80可使MAP下降,组胺升高,SC5b-9升高,Bb和C4d均升高。结论：双黄连注射剂具有明显的类过敏反应的特点。吐温80可发生明显的补体激活类过敏反应的特点,且可能激活了经典和旁路补体通路。BN大鼠对类过敏反应具有一定的敏感性。2.犬类过敏检测模型的优化目的：对犬类过敏模型进行优化,进一步探索类过敏发生机制。方法：在血液学指标组胺、IgE的基础上,增加补体片段Bb和C4d等检测指标的研究；在生理指标平均动脉压(MAP)、HR基础上,增加心电图(ECG)的分析,增加肺动脉压(PAP)的分析,从而对类过敏检测指标进行优化。同时应用该检测模型对10种中药注射剂、5种单体和2种辅料进行筛选。结果：双黄连注射剂、辅料吐温80和CrEL等均可引起犬的MAP的显著下降、组胺升高、IgE不变等情况。吐温80和CrEL亦可使SC5b-9升高,Bb和C4d升高。结论：双黄连注射剂、吐温80和CrEL具有明显的类过敏反应的特点。吐温80和CrEL具有补体激活的特点,且可能激活了经典和旁路补体通路。犬模型可用于补体介导的药物的类过敏反应筛选。3.小鼠类过敏检测模型的优化目的：通过小鼠检测条件的筛选,增加特征性指标,优化实验条件,建立更加稳定可靠的小鼠模型。方法：筛选依文思蓝溶液浓度以优化检测模型,通过增加H1受体阻断剂苯海拉明、肥大细胞膜稳定剂色甘酸钠等工具药物,初步探讨小鼠皮肤血管渗透性的发生机制。并对TCMI进行筛选。结果：苯海拉明、色甘酸钠等试剂在一定程度上可影响小鼠皮肤血管渗透性引起的蓝斑的生成。筛选的药物中,双黄连注射剂、茵栀黄注射剂出现了阳性反应。结论：小鼠皮肤血管渗透性实验在严格的控制条件下可使实验结果稳定,部分TCMI可能通过直接刺激肥大细胞而发生类过敏反应。4.体外补体检测模型的建立和优化目的：研究药物对空白血清中补体成分的刺激作用,对补体激活通路进行研究。方法：通过犬和人空白血清与药物的孵育实验,检测补体激活通路的指标,并通过EGTA/Mg2+、sCR1等补体通路的阻断剂对药物激活补体的机制进行研究。并用于TCMI的筛选研究。结果：吐温80、CrEL可以通过经典和旁路途径激活补体。结论：该模型适用于补体激活相关类过敏反应的补体通路的检测。