在法医毒物分析工作中,分析目标物的不确定性以及毒物种类的广泛性导致了法医毒物鉴定的复杂性。法医毒物分析工作者常常需要进行系统的毒、药物筛选分析。因此毒、药物筛选分析一直以来都是法医毒物学和临床毒物学面临的一个重要研究课题。就本实验室而言,分析的目标物以滥用药物为主,还包括临床药物、农药、鼠药,甾体激素等。液相色谱-高分辨质谱(LC-HRMS)是液相分离结合高分辨质谱检测的新型分析仪器。随着高分辨质谱仪由原来的大型装备发展为台式仪器,其近年来得到了迅速发展,已成为实验室常用设备。借助超高的分辨率,HRMS可以准确而可靠地测得化合物的精确质核比,并能区分复杂背景中质量数接近的杂质及共流出组分,具备复杂基质中痕量化合物的分析能力。采用的高分辨全扫描方式也不会遗漏未知化合物如代谢物的信息,是一种可以针对目标或非目标药毒物的筛选方法,在毒物分析领域得到越来越多的应用。本课题建立了1000种常见毒、药物的筛选方法,及500种毒、药物的HPLC-LTQ-Orbitra-MS筛选及确证方法,并以血液、尿液为生物检材,进行了方法学验证。一、常见毒、药物的HPLC-LTQ-Orbitrap-MS筛选方法建立了常见毒、药物的HPLC-LTQ-Orbitrap-MS筛选方法。该筛选方法基于精确质量数数据库。数据库中包含的毒、药物达1000余种,覆盖了常见毒、药物及其代谢物。该数据库基于化合物的精确相对分子质量,并包括化合物分子式,保留时间(如果有)等信息。对于具备标准品的500种常见毒、药物(包含违禁药物阿片类、苯丙胺类、大麻酚类,杀虫剂有机磷类、氨基甲酸酯类等,药物苯二氮卓类、抗抑郁药类、抗癫痫、哮喘类、解热镇痛类、抗生素类以及常见治疗药物等),建立了2种液相色谱分离体系,应用液相五氟苯基(PFP)色谱住分析含苯基的碱性化合物,应用液相十八烷基键合硅胶(C18)色谱住分析大极性(中性和弱酸性)化合物。采用电喷雾离子源(ESI)正离子全扫描模式和负离子全扫描模式,分辨率FWHM60,000进行检测,测得该500种化合物的保留时间,用于筛选分析。二、尿液中滥用药物的HPLC-LTQ-Orbitrap分析建立了尿液中69种滥用药物的HPLC-LTQ-Orbitrap-MS定性,定量分析方法。以吗啡-D3,甲基安非他命-D8,可卡因-D3为内标,尿样中的目标化合物经Oasis HLB固相萃取柱富集、纯化,利用五氟苯基(PFP)色谱柱,以0.1%的甲酸溶液-乙腈为流动相经梯度洗脱分离,采用ESI+全扫描模式,分辨率FWHM60,000进行分析。绝大部分化合物的最低检出限小于lng/mL,回收率>50%,基质效应>70%,日间、日内精密度均<15%。所建方法灵敏度高、选择性好,可用于法医毒物分析的滥用药物筛选与确证。三、HPLC-LTQ Orbitrap MS对血液、尿液中精神药品的筛选及确证建立了血样、尿样中精神药物的HPLC-LTQ-Orbitrap-MS筛选及确证方法。血样、尿样用乙腈沉淀蛋白后,过SiroccoTM蛋白沉淀板,富集纯化后使用HPLC-LTQ-Orbitrap-MS分离检测血样、尿样的中的目标化合物。以0.1%的甲酸溶液-乙腈为流动相经梯度洗脱分离,采用ESI+全扫描模式,分辨率FWHM60,000进行全扫描分析。通过碰撞诱导解离(CID)获得的特征子离子的精确质核比,可用于定性分析。血样、尿样中精神药物的LOD为0.01-20ng/mL,其中除劳拉西泮为5ng/ml,N-去甲基氟硝西泮为20ng/ml外,其余化合物的LOD均小于或等于0.1ng/ml。所有化合物的质量精度均小于1ppm。所建方法简便、快速、准确,可以满足法庭毒物分析的需要。综上所述,本文的创新点及研究的意义如下：1、建立了毒、药物的HPLC-LTQ-Orbitrap-MS筛选方法,该方法基于精确相对分子质量数据库,包含的毒、药物达1000余种,覆盖了常见毒、药物及其代谢物。建立的2种液相色谱分离体系,确保了绝大部分化合物至少在一种液相色谱分离体系中有好的色谱行为。并测得最常见500种毒药的保留时间及部分化合物的二级子离子的精确相对分子质量。所建方法不仅可用于筛选,而且可用于化合物的确证分析。方法可满足法庭毒物分析的需要,并在鉴定实践中得到了有效性验证。与文献资料比较,达到了国际先进水平。2、建立生物检材中吗啡类、大麻类、可卡因类、苯丙胺类、致幻剂类、精神药物的HPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析方法,并进行了方法学验证。所建方法均为国内首创,色谱分离、灵敏度等技术指标达到国际先进水平。