钠钙交换体在小鼠和大鼠卵母细胞老化过程中的作用

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哺乳动物成熟卵母细胞停滞在第二次减数分裂中期(MⅡ期),直到有精子穿入或给予物理或化学刺激时才能解除停滞并恢复减数分裂。停滞于MⅡ期的卵母细胞,最佳受精时间非常短。假若未在最佳时间窗口内受精,这些未受精的卵母细胞会发生老化,老化的卵母细胞发育能力变差、激活敏感性升高、碎裂率增加。众所周知,Ca2+在卵母细胞激活、老化和凋亡过程中发挥重要作用。然而,关于Ca2+在卵母细胞老化过程中的作用机制,特别是钠钙交换体(NCX)在卵母细胞老化过程中的作用,人们知之甚少。因此,我们研究了NCX在卵母细胞老化过程中的作用。结果如下:  (1)分别添加NCX抑制剂Bepridil和NCX的激活剂NaCl证明:小鼠新鲜卵中NCX无活性,而大鼠新鲜卵中NCX有活性;小鼠和大鼠老化卵中,NCX均有活性。  (2)使用酒精刺激小鼠新鲜卵后,[Ca2+]i升高;添加Na+/K+-ATPase抑制剂Ouabain,NCX的激活剂NaCl证明酒精刺激后的小鼠新鲜卵中NCX有活性。  (3)NCX有活性的卵母细胞中,[Ca2+]i升高或[Ca2+]i较高。  (4)小鼠和大鼠卵母细胞在体内老化后,ROS升高,并且在小鼠卵母细胞体外老化时添加H2O2显著降低NCX的表达。  (5)小鼠和大鼠卵母细胞在体内老化后,NCX蛋白表达量降低,并且激活敏感性增加。  (6)通过在小鼠卵母细胞体外老化时添加75mM的NaCl,激活NCX,可以有效抑制NCX表达量的降低。  总之,我们的结果表明,NCX参与卵母细胞老化和自发激活;ROS和Na+通过改变NCX的表达和功能来调控老化卵中NCX活性;[Ca2+]i升高是NCX激活的必须条件。此外,我们的实验结果对于成功获得体细胞核移植大鼠也有所帮助。
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