异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是当今治疗恶性血液病和非恶性血液病的有效手段，但是植入失败，本病复发和移植物抗宿主病(GVHD)仍是影响患者预后和生存的主要因素。移植后嵌合体的动态定量检测，有助于早期发现上述不良转归，并制定相关防治措施。 现有的嵌合状态的检测方法，如红细胞抗原、染色体、荧光原位杂交(FISH)、和可变数目串联重复序列(VNTR)等分别存在多态性程度低，敏感性差，费时长，对同性别移植和全血细胞减少患者的标本不能分析的局限性，临床急需建立一种鉴别力强，敏感性高，定量准确，不受性别限制的嵌合体检测方法。 鉴于此，我们将法医用于个体识别的荧光标记复合PCR扩增微卫星(或短串联重复序列STR)位点结合毛细管电泳技术应用于allo-HSCT术后供体细胞嵌合率(DC)的检测，并在其定性检测的基础上，根据毛细管电泳后DNA信息峰曲线下面积及标准曲线的制备，建立了供体细胞嵌合率的定量计算公式。为了获得准确的嵌合率计算结果，应取所有Ⅰ类位点嵌合率的均值，以消除扩增中产生的随机变异。通过体外人工嵌合体稀释试验验证了，细胞混合比例与扩增后供受体信息峰面积比值呈线性相关(r=0.993)。同时也验证了该方法的敏感性，可检出1-5％的微小细胞群体，平均灵敏度为3％。为了证实该方法的重复性，对同一标本进行了三次重复实验，嵌合体均数标准差为2.1％，此外，同一样本在2个不同实验室进行检测，嵌合率差别＜5％。AmpF／STR profiler plus试剂盒内9个位点，均为4碱基串联重复的微卫星位点，具有多态性强、高信息量、高鉴别力的特点，在54对供受体之间均找到了可区分彼此的信息位点，亲缘间供受差别的STR位点数平均有6个，无关供体有8个，证实用于法医个体识别的商品化试剂盒适用于移植后患者嵌合体的定量分析。总之，上述结果表明，复合扩增荧光标记的STR-PCR结合毛细管电泳技术是一项敏感性高，重复性好，定量准确，不受性别限制的嵌合体检测手段。 在方法学确立的基础上，我们对54例接受allo-HSCT的患者(包括标准骨髓移植BMT，外周血干细胞移植PBSCT，非清髓性干细胞移植NST和脐带血移植CBT)进行了供体细胞嵌合率的系列、定量检测，并研究了嵌合状态在植入动力学、临床转归、微小残留病变以及移植后过继免疫治疗中的应用。微卫星标志物在异基因造血干细胞移植中的应用中文摘要 首先，我们对18例接受NST的患者进行了DC的动态定量检测。NST是近年来兴起的一种新的移植方式和治疗理念，因其方案相关毒性低，并发症少，造血重建快和适应症广等优点，成为目前移植领域的研究热点，但对NST后嵌合体形成动力学，混合嵌合体(MC)的转归，MC对评价植入、本病复发、GVHD以及长期生存的作用均未见相关报道。我们对18例患者225次STR一PCR检测得出如下结果:1.移植后供体细胞嵌合率逐渐增高，并于+8天占据优势 (DC>6O%)，比造血重建早4天。CML患者供体细胞植入滞后于急性白血病和其他非恶性血液病患者，其原因可能是移植前患者免疫状态不同所致;2.NST后嵌合状态有一个由MC向FDC转化的过程，或自发转化，或通过免疫抑制剂的调整或通过供体淋巴细胞回输(DLI)诱导转化。MC状态即为移植后过继免疫治疗的“平台”;3.早期快速达到FDC状态的患者因供体免疫迅速完全的建立，有随后发生aGVHD的可能，这对早期发现aGVHD的高危患者，进行aGVHD的防治有重要的参考价值;4.移植后能获得无白血病生存的患者均有FDC或供体细胞高比例MC稳定嵌合的特点，而复发或排斥患者均在发生临床症状之前，出现供体细胞嵌合率的进行性下降。嵌合体的定期检查有助于预测移植后的临床转归及预后;5.对于处于混合嵌合状态的恶性血液病患者，可通过调整免疫抑制剂或DLI诱导MC向FDC转化，以GVL效应消除残存的肿瘤细胞，达到持续缓解及无病生存的目的。 由于NST与经典的all。一HSCT在预处理方案，造血干细胞来源和数量，GVHD的预防方案不同，因此推测在嵌合体的形成和转归上有差别，为此，我们对18例NST与20例BMT患者在嵌合体形成动力学方面进行比较，从而寻找影响嵌合体形成的影响因素。结果表明移植早期NST组供体细胞植入的速度快于BMT组，而且NST组达到FDC状态患者的比例明显高于BMT组，推测大量输入的供体造血干细胞以及供体T淋巴细胞对受体造血细胞的清除，是促成嵌合体的形成及向FDC的快速转化的主要因素，随着造血的重建，这种数量差异对DC的影响逐渐消失。 我们随访了54例allo一HSCT患者嵌合体情况，并对嵌合状态与移植后转归和长期生存的相关性进行研究。结果表明，FDC组长期生存率高于MC组，但无显著性差异。MC组患者植入失败和复发的发生率明显高于FDC组，伴有受体细胞比例增高的不稳定的MC预示着即将发生的移植物被排斥或复发，而供体细胞高比例的稳定MC状态与移植物被排斥或复发无关。这一结果再次表明嵌合乡微卫星标志物在异基因造血干细胞移植中的应用中文摘要体的连续定量检测可预见移植后患者的转归及预后。 STR一PCR是检出移植后患者体内残留的受体细