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年龄相关性白内障(Age-Related Cataract, ARC),是在中老年人群开始发生的进行性晶状体混浊。尽管手术可以提高白内障患者的视力,但其目前仍是世界上引起低视力和盲的主要原因之一。SIRT1是已被证实的miR-34a的靶基因之一,参与细胞凋亡、衰老和细胞代谢等过程。近来发现miR-34a表达水平上调与白内障发生密切相关,然而其在白内障发病中的具体机制仍不明确。为了探究miR-34a/SIRT1表达水平与白内障发病的相关性,我们检测2月龄、18月龄大鼠透明晶状体和白内障晶状体中的miR-34a/SIRT1表达水平差异；同时为了进一步探究miR-34a/SIRT1作用的相关机制,我们建立过氧化氢诱导晶状体上皮细胞(SRA01/04细胞)氧化应激损伤模型,观察氧化应激损伤情况下,SRA01/04细胞中的miR-34a/SIRT1表达水平；转染miR-34a mimics和miR-34a inhibitor,观察miR-34a表达水平变化对SRA01/04细胞氧化应激损伤的影响。第一部分：miR-34a/SIRT1表达水平与大鼠白内障发生的相关性研究目的：观察miR-34a/SIRT1及下游信号分子在大鼠白内障晶状体中表达水平的变化情况。方法：选取SD大鼠晶状体,分为3组,分别是2月龄透明晶状体、18月龄透明晶状体及同月龄的自然发生的白内障晶状体。采用实时荧光定量PCR检测各组miR-34a/SIRT1表达情况；采用Western blot检测SIRT1蛋白、P53及乙酰化P53蛋白表达情况。结果：荧光定量PCR结果显示：miR-34a在白内障大鼠晶状体中表达水平明显上调(t=-12.60,P=0.0002),同时伴随着SIRT1 mRNA表达水平下调(t=3.299,P=0.03)；与2月龄大鼠透明晶状体相比,18月龄老龄大鼠透明晶状体中miR-34a表达水平明显下调(t=9.609,P=0.0007),相应的SIRT1 mRNA表达水平则上调(t=-7.242,P=0.0019)。Western blot检测结果显示：SIRT1蛋白在白内障大鼠晶状体中表达降低(t=8.924,P=0.0009),相应的P53乙酰化明显的增加(t=-9.280,P=0.0008)；而18月龄老龄大鼠透明晶状体中SIRT1蛋白较2月龄大鼠晶状体呈明显增加(t=-3.419,P=0.0345),相应的P53乙酰化明显的降低(t=4.768,P=0.0089)。结论：miR-34a表达水平上调与大鼠白内障发生相关,可能通过调控SIRT1蛋白表达下降,促进P53乙酰化,从而引起大鼠白内障发生。第二部分：miR-34a/SIRT1在人晶状体上皮细胞氧化应激损伤中的作用目的：观察miR-34a/SIRT1在人晶状体上皮细胞氧化应激损伤中的作用。方法：用H2O2诱导SRA01/04细胞,建立氧化应激损伤模型；用实时荧光定量PCR检测,miR-34a/SIRT1/P53表达水平与氧化应激损伤的相关性；用CCK-8检测转染miR-34a mimics和miR-34a inhibitor对SRA01/04细胞氧化应激损伤细胞增殖的影响。结果：H2O2诱导SRA01/04细胞氧化应激损伤呈剂量依赖性,当H2O2浓度为200 μM时,细胞生存率约为50%;miR-34a在SRA01/04细胞氧化应激损伤中表达水平呈明显上调,而相应的SIRT1和P53 mRNA表达水平呈明显下调；上调miR-34a可促进SRA01/04细胞氧化应激损伤,而下调miR-34a可抑制SRA01/04细胞氧化应激损伤。结论：miR-34a可通过调控SIRT1基因表达,参与晶状体上皮细胞氧化应激损伤。