嗅鞘细胞表型特性和对mSOD1ALS大鼠的治疗研究

来源 :泰山医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bingdaogege
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:
   大量的临床研究显示,嗅鞘细胞移植可治疗多种中枢神经系统疾病。然而目前临床所使用的嗅鞘细胞严格意义上说,是嗅球来源以嗅鞘细胞为主的混合细胞。本实验的目的旨在更深入的研究和讨论临床移植所用嗅鞘细胞各种成分的含量及其在嗅神经层和嗅球小球层的分布情况。
   方法:
   1.嗅球免疫组织学研究:取孕20周胚胎嗅球标本,4%的多聚甲醛固定液固定2小时,随后置于蔗糖溶液中,待沉糖后做连续冰冻切片。分别做P75与S100β、Laminin、Nestin及GAFP染色,并以Hoechest做核染。
   2.嗅鞘细胞的培养:无菌条件下,用显微器械将胚胎的嗅球取出,在解剖显微镜下仔细剥离嗅球表面的软磨和血管,尽量保持嗅球的完整性,然后用眼科剪反复剪碎,剪成0.5-1.0mm3大小的组织块,将组织块移入离心管内,加入含有13%胎牛血清的D/F12培养液,用弯头吸管来回轻轻吹打组织块,制成细胞悬液,胰蛋白酶消化后收集细胞,以20%的血清培养基制成细胞悬液平均铺入细胞培养板中,在CO2培养箱中培养。
   3.嗅鞘细胞的鉴定:将培养好的细胞以105/ml的浓度接种于置放盖玻片的24孔培养板中。待完全贴壁后以4%的甲醛固定。PBS清洗后,以10%的山羊血清封闭1小时,滴加以封闭液配置的一抗孵育1小时。PBS清洗后滴加二抗,并以Hoechest做核染。
   4.激光共聚焦显微镜观察及细胞计数:染色后的冰冻切片及细胞培养片使用用蔡司LSM510共聚焦显微镜观察染色结果,并使用蔡司Axio视觉软件进行细胞计数。
   结果:
   1.人胚胎嗅鞘细胞在嗅神经层的分布:嗅神经层的外层有强烈的P75NTR阳性细胞表达,且周围有大量的轴突束,而内层的表达较弱。同样的,在ONL的外层和内层均表达GFAP,但并不共染。
   2.人胚胎嗅鞘细胞在嗅球小球层的分布:嗅球的小球层位于ONL的深部,P75NTR阳性的嗅鞘细胞包绕于小球层外侧,GAP-43也可强烈表达,并包绕整个小球层。MAP-2可用来标记小球层中心的神经元树突,特别是早期发育的嗅球中间位置
   3.人胚胎嗅鞘细胞的免疫组织化学特征:人胚胎嗅鞘细胞的培养分为两组。一部分为嗅鞘细胞的小组织块培养,另一部分为嗅鞘细胞培养。大约有21.45%的P75NTR阳性细胞及32.51%的GFAP阳性细胞,但不共染;P75NTR阳性细胞与部分S100β共染。几乎所有的GFAP阳性的嗅球细胞与部分S100B完全共染;几乎全部的P75NTR阳性嗅球嗅鞘细胞与NCAMs共染,并分布于组织块的周围及内部;部分P75NTR阳性嗅鞘细胞与nestin共染;P75NTR阳性OB-OEC细胞完全不于FBN-1共染。
   结论:
   在孕20周的胚胎嗅球中,P75NTR阳性的嗅鞘细胞分布于嗅球的嗅神经层外缘,并参与小球层的形成,在胚胎发育中期,嗅球嗅鞘细胞可表达P75NTR,GFAP和S100β。
其他文献
期刊
期刊
期刊
期刊
期刊
期刊
期刊
期刊
期刊
期刊