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大黄为我国常用的中药之一，在多种疾病的治疗中起重要作用，被称为中药“四大金刚”之一，临床应用广泛，全国8000多种中成药制剂中约有800多种含有大黄。大黄主要有效成分为蒽醌类化合物，包括大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等。虽然传统医学并未将其列为有毒药物，但近年来关于大黄不良反应的报道屡见不鲜，造成其不良反应发生率增高的原因是多方面的，其中滥用和用药疗程过长是主要原因之一。尤其是多数的降脂减肥、排毒养颜类中成药中均含有大黄，造成大黄的长期、非适应症性用药。有报道大黄对生殖系统有一定的毒性。为了探讨大黄的生殖毒性，毒性反应的程度及其与用药剂量、用药时间的关系，以及其毒性反应与动物的生理发育阶段的关系，本研究以成年及幼年大鼠为观察对象，以睾丸指数、精子数、精子活动率及畸变率为观察指标，观察不同剂量的大黄水提取物、总蒽醌对不同年龄大鼠的生殖功能的影响。并以血清中睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素和睾丸中bcl-2、bax蛋白表达水平为指标，初步探讨了大黄毒性反应的机制。旨在为大黄的临床安全、合理应用提供实验依据。第一部分大黄对成年雄性大鼠的生殖毒性与剂量关系研究目的：探讨长期应用大黄提取物对雄性成年大鼠生殖功能的影响与用药剂量的关系。方法：8周龄SD大鼠50只，随机分为正常对照组(NC组)，大黄水提取物（RWE）0.3g·kg-1、0.6g·kg-1、1.2g·kg-1剂量组及大黄总蒽醌（RTA)0.1g·kg-1剂量组。连续灌胃（ig）给药30天。取睾丸和附睾称重，计算脏器指数。采用HE染色法进行病理学检查，采用红细胞计数法检测精子数，采用伊红活体染色法检测精子活动率和畸变率，采用ELISA法检测血清中睾酮（T）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）浓度；采用免疫组化SP法检测睾丸Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果：RWE各组及RTA组大鼠精子数量和活动率均明显低于NC组，各组间差异具有统计学意义（P<0.05），精子畸变率与NC组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；血清中T明显低于NC组，LH及FSH显著高于NC组，各组间差异具有统计学意义（P<0.05）；睾丸生精上皮和睾丸间质细胞内Bax蛋白表达显著高于NC组，而Bcl-2蛋白表达显著低于NC组，各组间差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：长期应用大黄对成年大鼠睾丸功能有较强的毒性，促使睾丸细胞凋亡，其中以间质细胞凋亡最显著，从而减少T的合成，其毒性反应程度有明显的剂量依赖关系。第二部分大黄对幼年雄性大鼠生殖毒性的影响目的：探讨长期应用RWE及RTA对幼年雄性大鼠生殖功能的影响。方法：3周龄SD大鼠50只，随机分为NC组，RWE0.3g·kg-1、0.6g·kg-1、1.2g·kg-1剂量组及RTA0.1g·kg-1剂量组。连续ig给药30天。取睾丸和附睾称重，计算脏器指数。采用HE染色法进行病理学检查，采用红细胞计数法检测精子数量，采用伊红活体染色法检测活动率和畸变率，采用ELISA法检测血清中T、LH、FSH浓度；采用免疫组化SP法检测睾丸Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果：RWE0.6g·kg-1、1.2g·kg-1组和RTA组睾丸、附睾指数均明显低于NC组（P<0.05）；所有给药组大鼠精子数量和活动率均明显低于NC组，各组间差异具有统计学意义（P<0.05），精子畸变率与NC组比较差异无统计学意义（P>0.05）；血清中T含量明显低于NC组，LH及FSH含量显著高于NC组，各组间差异具有统计学意义（P<0.05）；睾丸生精上皮和睾丸间质细胞内Bax蛋白表达显著高于NC组，而Bcl-2蛋白表达显著低于NC组，各组间差异具有统计学意义（P<0.05）。而成年大鼠组RWE0.3g·kg-1组的精子活动率、睾丸和附睾重量及指数、T、LH、FSH水平与NC组比较差异无统计学意义（P>0.05），幼年大鼠组RWE0.3g·kg-1组的精子活动率、睾丸重量、T、LH和FSH水平与NC组比较差异具有显著的统计学意义（P<0.05）。结论：长期应用大黄对幼年雄性大鼠生殖功能的影响强于成年大鼠，幼年大鼠对大黄的耐受性明显低于成年大鼠，提示其对发育期雄性动物生殖功能影响更强，其毒性反应程度有明显的剂量依赖关系。第三部分大黄对成年雄性大鼠生殖毒性与给药时间关系的研究目的：探讨RWE对成年雄性大鼠生殖毒性与给药时间的关系。方法：8周龄SD大鼠60只，随机分为6组，NC组10只，其余各组给予同等剂量RWE，分别于给药0天、20天、30天、40天、50天、60天各处死10只大鼠。取睾丸和附睾称重，计算脏器指数。采用HE染色法进行病理学检查，采用红细胞计数法检测精子数量，采用伊红活体染色法检测活动率和畸变率，采用ELISA法检测血清中T、LH、FSH浓度；采用免疫组化SP法检测睾丸Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果：给药40、50及60天组大鼠睾丸指数均明显低于NC组、20天和30天组（P<0.05）；所有给药组大鼠精子数量和活动率均明显低于NC组，各组间差异具有统计学意义（P<0.05），精子畸变率与NC组比较差异无统计学意义（P>0.05）；血清中T浓度明显低于NC组，LH及FSH浓度显著高于NC组，各组间差异具有统计学意义（P<0.05）；睾丸生精上皮和睾丸间质细胞内Bax蛋白表达显著高于NC组，而Bcl-2蛋白表达显著低于NC组，各组间差异具有统计学意义（P<0.05）；而50天和60天组之间的差异不统计学意义（P>0.05）。结论：RWE对成年雄性大鼠的生殖毒性与给药时间呈正相关。