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目的观察在不同时段HTLV-1病毒Tax蛋白对T淋巴细胞系Jurkat E6-1细胞内NFκB活性和Bcl3表达的影响及其变化趋势,为研究ATL的发病机制奠定基础;研究NFκB通路抑制剂对NFκB活性和Bcl3表达的影响,以评价其抑制效果,为进行下一步相关研究提供依据。方法(1)利用脂质体将实验组HTLV-1病毒Tax基因表达载体pCMV-Tax-Bam与NFκB荧光素酶报告基因(pNFκB-luc)及对照组空载体pCMV-Bam与pNFκB-luc共同转染入JurkatE6-1,同时将实验组pCMV-Tax-Bam与Bcl3荧光素酶报告基因(pGL3-Bcl3-luc)及对照组空载体pCMV-Bam与pGL3-Bcl3-luc共同转染入JurkatE6-1,分成不同时间组,裂解细胞检测各个时间转染细胞内的荧光素酶活性;(2)利用脂质体将实验组pCMV-Tax-Bam和对照组空载体pCMV-Bam分别转染入JurkatE6-1,在不同时间段,提取细胞RNA和细胞蛋白,荧光定量PCR检测p65,Bcl3在不同时间段基因转录水平上的变化,Western Blot检测Bcl3蛋白表达情况;(3)继续上述(1)(2)转染实验,此次转染后4h实验组细胞培养液中加入NFκB通路的抑制剂Bay11-7082,32h进行上述各项检测,目的是观察NFκB活性和Bcl3表达被抑制的效果。结果(1) pNFκB-luc和pGL3-Bcl3-luc检测提示从6h开始实验组转染细胞内的荧光素酶活性都要高(p<0.01),随着时间的增加4h,6h,8h变化不显著,16h明显增加,24h达到高峰(p<0.05),可持续增高到32h,稍有回落趋势,但不显著(p>0.05)。(2)在Bay11-7082作用下实验组与对照组相比荧光素酶活性仍是高水平(p<0.01);对于实验组Bay11-7082对Bcl3表达抑制作用不够明显(p>0.05),但使得对照组Bcl3表达显著降低(p<0.01);Bay11-7082使得实验组和对照组NFκB活性显著降低(p<0.01)。(3)荧光定量PCR结果显示从6h开始实验组在不同的时间段, Bcl3 mRNA表达增高(p<0.05),在Tax刺激下随着时间的推移Bcl3mRNA表达增高, 16h达高峰(p<0.01),可持续增高到32h,稍有回落趋势,但不显著(p>0.05)。抑制剂作用时实验组Bcl3mRNA表达仍高(p<0.05)。但是p65mRNA表达没有显著性差异(p>0.05)。(4) Western blot结果显示Bcl3蛋白水平与Tax刺激相关,随着时间的增加Bcl3表达增强,在24h表达最强,可持续到32h。加抑制剂后实验组Bcl3蛋白水平仍是升高的。结论HTLV-1病毒Tax蛋白能增强NFκB的活性,同时增加Bcl3基因的表达;在Tax蛋白持续作用下随时间推移NFκB活性和Bcl3基因表达增强,24h达到高峰,随后有回落趋势,但不显著;这说明ATL的发生可能与NFκB信号传导通路和Bcl3的高表达密切相关。加抑制剂实验组NFκB活性和Bcl3基因表达仍然是增强的;这说明Tax能抵抗抑制剂对NFκB和Bcl3的抑制作用,有可能与Tax同时通过非经典途径激活NFκB有关。