禽白血病(Avian leukosis，AL)是一种由禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus,ALV）引起的鸡的以垂直传播为主的肿瘤性传染病，目前在世界上广泛分布。随着科学家不断的研究和探索，目前已经发现A、B、C、D和J亚群5种外源性的白血病病毒，以及E、F、G、H和I亚群5种内源性病毒。在鸡群中可分离到的ALV分别属于A、B、C、D、E和J6个亚群，近年研究者认为我国鸡群中存在K亚群ALV。总结以往的研究发现，A亚群、B亚群和J亚群是现场流行最广的ALV亚群。本实验室于2017年从疑似患有AL的河田鸡中分离并鉴定了自然重组毒株ALV-FJ15HT0，该毒株具有ALV-B特异性gp85基因序列、ALV-E gp37序列和ALV-J LTR序列。为研究该毒株的分子特性及致病特性，本研究通过建立人工感染动物模型，模拟垂直传播，并且通过转录组测序分析，进一步探究参与重组ALV与宿主细胞之间互作的基因，并且从蛋白质水平上加以分析验证，为进一步研究自然重组ALV的致病机制等提供科学数据。　　1.感染组鸡体重及免疫器官指数的变化　　在2d、5d、9d、13d、17d、21d时称量空白对照组和垂直感染组鸡体重，采集血液、肝脏、脾脏、法氏囊和胸腺，并且称量器官重量，计算免疫器官指数，使用qRT-PCR在不同时间点测量gp85在不同组织中的表达。结果显示，感染组鸡胚在孵化后生长受到显著性抑制（P＜0.01），感染组法氏囊器官指数显著受抑（P＜0.05），而感染组和对照组的脾脏，胸腺和肝脏器官指数在检测的这6个时间点上没有显著差异（P＞0.05）。随着日龄的增长，ALV病毒含量随着日龄的增长而显著增加；相关性分析显示，包括法氏囊（r=-0.546），脾脏（r=-0.502）和肝脏（r=-0.517）在内的感染组织中gp85基因表达的变化与相应的体重差异之间呈现出显著相关性（P＜0.05），感染组胸腺组织中gp85转录水平变化与相应的体重差异之间呈现出极显著相关性（r=-0.559，P＜0.01）。　　2.自然重组ALV感染SPF鸡胸腺转录组学分析　　本研究将ALV-FJ15HT0接种到6胚龄（ED）SPF鸡胚的卵黄囊中模拟垂直传播，同时设立空白对照组。分别于5日龄（d）、13d和21d时无菌采集空白对照组和感染组鸡胸腺进行转录组测序。结果显示，5d时在两组动物胸腺样品中检测到227个差异表达基因（DEG）、13d检测到286个DEG，21d检测到251个DEG，这些DEG主要涉及细胞过程、结合、生物学调节、代谢加工、刺激反应和免疫系统等反应。通过信号通路富集分析发现，这些DEG主要涉及的信号通路有烟酸和烟酰胺代谢、细胞因子-细胞因子受体相互作用、脂肪酸降解、PPAR信号通路、细胞外基质受体相互作用、细胞粘附分子、JAK-STAT信号通路等。运用qRT-PCR技术对转录组测序得到的部分差异表达的基因进行验证，结果显示两者的检测结果相一致。　　3.睫状神经营养因子（CNTF）及其受体（CNTFRα）参与病毒宿主互作　　通过信号通路分析，发现一个有趣的基因即CNTFRα在感染SPF白莱杭鸡胸腺中表达显著上调，经过对该基因的动态表达进行qRT-PCR检测。结果显示，在感染鸡胸腺中CNTFRα基因表达在13-21d期间极显著上调（P＜0.01），对感染鸡和对照鸡群血清CNTF滴度进行ELISA检测发现感染鸡血清CNTF在17-21d显著上升（P＜0.05）。　　通过Pearson相关性分析发现：感染鸡胸腺中CNTFRα基因表达水平与相应的gp85基因表达水平呈现极显著正相关关系（r=0.656,P＜0.01），进一步验证发现，感染鸡肝脏中CNTFRα基因表达水平与相应的gp85基因表达水平呈现显著正相关关系（r=0.525,P＜0.05），可知CNTF及CNTFRα可能参与重组ALV与宿主之间的互作。　　通过原核表达技术获得鸡CNTFRα蛋白并进行纯化，浓度达到0.6mg/mL。将纯化后的蛋白在新西兰白兔皮下进行5次多点注射免疫，使其产生抗体。使用Western Blot技术对兔血清抗鸡CNTFRα抗体进行特异性检测，结果显示，抗体浓度在1:2000时，抗体结合率最高且特异性强。　　以Western Blot鉴定空白对照组和垂直感染组动物胸腺CNTFRα蛋白。结果显示，空白对照组和垂直感染组鸡胸腺中CNTFRα蛋白表达水平均随着日龄增加而降低，在13-21d时，垂直感染组鸡胸腺中CNTFRα蛋白表达水平显著高于空白对照组（P＜0.05），这一结果与CNTFRα转录水平结果相一致。进一步证实CNTFRα参与病毒与机体的互作。