果蝇的Translin-Trax八聚体蛋白被命名为C3PO（Component 3 Promoter of RISC）是由于其在Ago2相关的pre-RISC向成熟的RISC转化过程中起到了促进作用。siRNAs在Dcr2与R2D2的协同作用下,被带进Ago2中,并与Dcr2,R2D2以及Ago2形成了成熟的RISC前体。这个RISC前体要变成一个成熟的RISC需要将Ago2上结合的双链siRNAs变成单链siRNA。这个过程牵涉到Guide strand的选择,Passenger strand的切割以及切割产物从RISC中的移除及自身降解。Translin-Trax八聚体能够帮助Passenger strand顺利降解。它本身就是一个镁离子依赖的核酸内切酶,序列长度在7nt以上的核酸单链都能被它切割。在移除并降解了单链的siRNA之后,这个八聚体蛋白有了新的名字——C3PO。C3PO有助于Ago2-RISC的成熟,这意味着RISC发挥作用将更有效率。基于C3PO的这一特点,我们开始了对C3PO在果蝇中小RNA通路的功能研究。在果蝇的exo-siRNAs通路中,RISC的核心蛋白是Ago2。我们用dsEGFP-pAc5.1/V5-His B-EGFP这个EGFP报告系统来反映果蝇中C3PO被敲减之后的exo-siRNAs通路的RNA干扰效果的强弱。结果表明,敲减Translin或者Trax任意一个都会减弱C3PO的活性,进而降低该通路的RNA干扰,使本应被沉默的EGFP表达水平得到了恢复。我们进一步研究敲减C3PO对果蝇endo-siRNAs通路的影响。在这个实验中,我们在敲减Translin这个保证C3PO稳定性的蛋白之后,发现pMT-EGFP-esi-2.1受到内源性小RNA的基因沉默效果减弱了。我们对野生型果蝇与Translin突变果蝇进行小RNA高通量测序,发现在突变果蝇中,esi-2.1的passenger链含量上升了,并且guide链含量也随之上升了。这个现象说明缺少了C3PO的帮助,Ago2-RISC的活性降低,内源性的小RNA干扰效果减弱。研究了C3PO在两个以Ago2作为RISC核心的小RNA通路中的功能之后,我们继续观察它的缺失对miRNAs通路活性的影响。首先我们分析突变果蝇与野生型果蝇的小RNA高通量测序数据,发现Translin突变果蝇的miRNAs含量高于野生型。继而通过pMT-EGFP-bantam-bulged这个报告质粒,我们发现在C3PO敲减的细胞中,miR-bantam含量增加,其对目的基因的翻译抑制效果也增加。我们得出结论,C3PO在miRNAs通路中发挥作用不再依赖Ago蛋白,而是负责降解细胞质中游离的miRNAs。这样C3PO即防止星链的堆积,又加快了从靶基因上脱落下来的成熟链的降解,保证果蝇自身基因调控的正常进行。