论文部分内容阅读
本文主要从以下两部分展开：
第一部分：青少年特发性脊柱侧凸MSCs的体外分离、培养、扩增及表型鉴定
目的：建立AIS患者骨髓间质干细胞(MSCs)体外分离、培养、扩增及表型鉴定的方法，为后续分子生物学检测做准备。
方法：所有研究对象分为2组：AIS组30例，均为女性，年龄12～17岁，平均14.1岁。正常对照组14例，5例男性，9例女性，年龄12～17岁，平均14.7岁。无菌条件下分别从髂前上棘处穿刺抽取10ml骨髓，肝素抗凝。采用密度梯度离心法体外分离MSCs，原代培养并传至P2代行细胞记数，同时记录细胞样本各代的增值时间。取P2代细胞经流式细胞仪行MSCs的表型鉴定。
结果：2组分离所得的原代单个核细胞均呈贴壁生长，体外培养24小时后细胞呈圆形，72小时后细胞逐渐变为长梭形，并呈集落样生长。P2代细胞总数平均可达1×107个。2组细胞各代平均增值时间无统计学差异(P＞0.05)，从P0～P2代平均约需26天。P2代单个核细胞经流式细胞仪鉴定其表型与MSCs表面标记相符。
结论：AIS患儿与正常对照组在体外分离、培养、扩增MSCs时所表现的生长及增殖特性一致。
第二部分：RANKL及OPG与青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者骨量降低的关系
目的：从骨髓间质干细胞(MSCs)水平探讨RANKL及OPG与青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者骨量降低的关系。
方法：44例12～17岁志愿者分为2组，其中AIS组30例，年龄12～17岁，平均14.1岁。正常对照组14例，年龄12～17岁，平均14.7岁。AIS组Lenkel型14例，2型2例，3型6例，5型8例。2组均采用双能X线吸收测量仪测量BMD，测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。分别从2组志愿者髂前上棘处骨穿刺抽取10ml骨髓，肝素抗凝。体外密度梯度离心法分离培养MSCs，扩增至P3代行表型鉴定，RT—PCR法检测2组MSCs中RANKL及OPG的mRNA表达强度。
结果：AIS组腰椎(L2-L4)及股骨近端的BMD值明显低于正常对照组。AIS组RANKL的mRNA表达显著强于对照组(P＜0.01)，而OPG的mRNA表达显著低于对照组(P＜0.01)。
结论：RANKL及OPG在MSCs水平表达强度的异常可能与AIS骨量降低的分子机制相关。