采用组织芯片技术研究人类β-防御素在声带息肉中的表达及意义

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目的:运用现代免疫组织化学染色方法,利用组织芯片这一新技术,检测人类β-防御素1(human beta-defensin 1,hBD-1)、人类β-防御素2(human beta-defensin 2,hBD-2)在声带息肉组织中的表达,探讨两者之间有无关联,分析它们在声带息肉发病机理中的作用。方法:构件布有实验组声带息肉51例,对照组声带结节26例以及正常声带组织标本8例共85例有效样本的组织芯片,进行hBD-1、hBD-2的S-P免疫组织化学染色法,观察hBD-1、hBD-2的表达情况,运用SPSS11.5统计软件分析其表达率、表达强度及联合表达情况,做Krusal-Wallis检验及相关性检验,计算出P值(取P<0.05为差异有显著性)。结果:1)组织芯片蜡块表面及四周无裂开现象,蜡质细腻均匀,组织点列阵模块排列整齐,切片后可见组织例数/点样例数=85/105。经HE染色后,见组织芯排布均匀,虽有个别组织点发生了脱片、易位和皱折,但组织学可观测率仍为98%以上。每一组织点中均可见具有诊断意义的上皮组织结构。在可供评价的85例中,组织芯片与常规组织切片hBD-2的表达符合率为95.29%(81/85),二者的表达在统计学上无显著差异(P>0.05)。2)hBD-1在实验组和两对照组中均以低表达为主,实验组(声带息肉组)阳性率96.08%(49/51),阴性率3.92%(2/51);对照组:声带结节组:阳性率96.16%(25/26),阴性率3.84%(1/26),正常声带组:阳性率87.5%(7/8),阴性率12.5%(1/8),三者之间差异无统计学意义(P>0.05);声带息肉组中,男性阳性率为95.6%(22/23),女性阳性率为96.4%(27/28),差异无统计学意义(P>0.05)。3)hBD-2在两对照组表达较少,但在实验组出现表达明显增高,实验组(声带息肉组)阳性率100%(51/51),阴性率0%(0/51);对照组:声带结节组:阳性率23.08%(6/26),阴性率76.92%(20/26),正常声带组:阳性率25%(2/8),阴性率75%(6/8),三者之间阳性率差异有统计学意义(P<0.05);而各组之间进行Mann-Whitney U检验,实验组与两对照组之间差异均有统计学意义(P<0.017),而两对照组声带结节组与正常声带组之间差异无统计学意义(P>0.017)。同时实验组与两对照组相比hBD-2有着更高程度的表达,以++为分界(如表2),实验组高表达的为62.75%(32/51),对照组:声带结节组为0%(0/26),正常声带组为0%(0/8),三者间差别有统计学意义(P<0.05)。声带息肉组中,男性阳性率为100%(23/23),女性阳性率为100%(28/28),差异无统计学意义(P>0.05)。4)声带息肉组hBD-1和hBD-2的表达呈正相关(r=0.433,P=0.017<0.05)。结论:1)hBD-1在实验组和两对照组中均为低强度表达,且三组间差异无统计学意义(P>0.05),提示hBD-1为固有性表达。2)hBD-2在两对照组中仅有微弱表达,而在声带息肉组中表达明显增强(P<0.05),提示hBD-2为诱导性表达。3)应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的,具有快速、方便、经济、准确的特点。4)组织芯片与免疫组织化学染色方法结合时,为了减少脱点及误差,可通过增大样本组织或采取2点甚至多点取材的措施。
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