c(RGDfK)肽影响成骨细胞粘附、增殖的体外实验研究

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目的研究c(RGDfK)肽修饰后的纯钛表面对小鼠成骨细胞黏附、增殖的影响。方法应用微弧氧化技术在钛片表面构建TiO2多孔生物陶瓷薄膜、再利用多巴胺化学偶联技术将目的RGD引入到TiO2多孔生物陶瓷薄膜上。将微弧氧化处理后钛片定义为微弧氧化组,简称为“M组”,即为对照组;将通过多巴胺接枝偶联上GRGDSP多肽的钛片定义为线型多肽组,简称为“X组”;将通过多巴胺接枝偶联上c(RGDfK)多肽的钛片定义为环形多肽组,简称为“H组”。并采用扫描电镜(SEM)对三组试件进行形貌观察,能谱分析仪(EDAX)分析表面元素。通过体外实验,在各组试件上培养MC3T3-E1细胞。细胞粘附实验检测细胞在培养60min、120min、180min、240min后的吸光度值,细胞增殖实验检测细胞在培养1d、3d、5d后的吸光度值,激光共聚焦观察细胞在培养24h后的生物学形态。结果扫描电镜检测发现,钛片经过微弧氧化处理后在表面外貌成多孔状;由于多巴胺的修饰后,TiO2生物陶瓷层的口径变小,部分被堵塞。而且可以明显的看到涂层表面颗粒状的RGD肽,分散后聚集,部分进入到微孔内。能谱分析显M组的钛片表面元素主要为O、Si、P、Ti,X组和H组的钛片表面的C、N元素明显增多,表明多巴胺和RGD肽的成功引入。细胞粘附实验结果显示,在240min时M、X、H组的吸光度值分别为0.693、0.812、0.867,表明X组细胞粘附的数量皆高于M、H组。细胞增殖实验结果显示,在H组试件表面细胞培养1d、3d、5d后的吸光度值为0.638、0.892、1.193皆显著大于X、M两组,说明H组试件表面细胞增殖状况最佳。且各组比较具有统计学意义(P<0.05)。激光共聚焦观察细胞在X组和H组表面的状态均好于M组,但H组表面细胞的数目更多,丝足铺展的面积更大。结论纯钛表面微弧氧化后以多巴胺为偶联剂,载入环形肽c(RGDfk)的功能涂层,在体外细胞实验中表现了良好的生物相容性和生物活性,且优于其他两组,说明环形肽c(RGDfk)在促进细胞的黏附、增殖的作用上有明显的优势。
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