论文部分内容阅读
目的：
1.探讨E1A基因对鼻咽癌细胞放射治疗增敏作用及相关机制，从而为E1A基因提高鼻咽癌放射治疗疗效提供实验依据。
2.探讨E1A基因对人鼻咽癌癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和放疗增敏作用及其相关机理
方法：
经腺病毒介导，将E1A基因导入人鼻咽癌细胞系CNE2细胞。G418筛选后，经RT-PCR鉴定，获得含E1A的阳性克隆。将未转染的CNE2细胞、转染对照空载体Ad-β-gal的CNE2细胞和转染ElA的CNE2细胞取0、1、2、4、6、8GY剂量点，用6MV的X线照射以制作放射存活曲线；4GY单次照射后不同时间用MTT法测细胞存活率。流式细胞术和RT-PCR检测转染前后的细胞周期分布以及wt-p53表达情况。通过裸鼠致瘤实验，观察了E1A基因的抑瘤作用；通过模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验，观察E1A基因及其与放疗联合应用在动物体内的疗效；采用RT-PCR法检测E1A基因对鼻咽癌组织wt-p53表达的影响。
结果：
1.(1)转染后的阳性克隆细胞RT-PCR结果说明：E1A已整合到细胞基因组中并且稳定表达。(2)细胞放射存活曲线结果显示：转染的CNE2细胞Do=0.674，Dq=1.27；对照空载体转染Ad-β-gal后的CNE2细胞Do=0.626，Dq=1.2l；E1A转染后的CNE-2细胞Do=0.202，Dq=0.489。未转染及对照空载体转染Ad-β-gal后的CNE-2细胞照射后细胞存活无明显差异，而E1A转染后的CNE-2细胞照射后细胞存活明显下降，存活曲线的肩区变窄，Dq值降低。(3)4GY照射后不同时间转染前后的细胞存活率以12小时最低，未转染的CNE-2细胞与转染E1A的CNE-2细胞12小时存活率分别为：51.3％、20.4％，经t检验均有显著差异。(4)4细胞周期出现G2/M期阻滞，RT-PCR结果显示E1A基因能提高wt-p53的表达。
2.裸鼠致瘤实验结果显示：CNE2-Ad-ElA细胞形成的肿瘤较CNE2和CNE2-Ad-β-gal的出瘤时间晚，生长慢，瘤重小，抑瘤率为70.57％。模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验结果显示：Ad-E1A、放疗及Ad-E1A+放疗3种治疗方法均可抑制肿瘤生长，与Ad-β-gal对照组相比，抑瘤率平均值分别为：60.32％、70.53％和97.15％，与放疗组相比，E1A基因加放疗组的抑瘤率为89.3％。RT-PCR显示E1A基因能提高鼻咽癌组织wt-p53的表达。
结论：
1.本实验的结果证实E1A使CNE-2细胞照射后的问期死亡和增殖死亡均提高，使细胞的放射敏感性增加。上述作用可能与E1A基因提高wt-p53基因的表达和引起G2/M期阻滞有关。
2.E1A基因能够明显抑制人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长并显著增加其对放疗的敏感性，具有较好的临床应用前景，该作用可能与E1A基因提高鼻咽癌组织wt-p53的表达有关。