辣椒CaLRR蛋白cDNA的分离及其抗细菌、病毒的初步功能研究

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辣椒(Capsicum annunm)是病害较多、不耐连作而又十分重要的蔬菜和加工原料作物,基于抗病功能基因组学和抗病分子机制研究的抗病基因工程及其与常规育种相结合是解决辣椒病害问题的根本技术途径。本研究从辣椒cDNA文库中分离得到LRR类基因cDNA全长的基础上,进一步通过构建载体和转化烟草,获得了转基因烟草植株和株系,并利用了T0代植株对LRR基因的超表达抗病功能进行了初步的分析,主要结果如下: 1)LRR候选基因的cDNA的分离及其结构分析:本研究采用基于PCR技术的96孔板cDNA文库筛选的方法,获得了一个LRR类基因cDNA全长。经生物信息学分析,该基因包含一个植物特异性的LRR基序及一个由疏水性氨基酸组成的跨膜区域,序列分析发现该基因可能参与响应不同病原菌的应答反应,是一种抗病基因。 2)载体构建及烟草遗传转化:通过Gateway载体构建技术构建了该基因的植物干扰表达载体和植物超表达载体,用农杆菌介导的方法转化烟草,获得50个T0代烟草超表达株系。 3)LRR在转基因烟草中超表达的抗病作用初步分析:对T0代烟草超表达株系进行青枯病和烟草TMV的抗病分析,初步发现LRR超表达植株相对与野生型植株表现出较为明显的抗青枯病和TMV的能力。同时,初步观察发现,LRR基因在烟草中超表达植株中叶片的衰老进程较野生型植株有所加快。
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