论文部分内容阅读
目的：通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)及激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术,检测SCF干预对高糖环境下体外培养的豚鼠膀胱Cajal样间质细胞c-kit mRNA及蛋白的表达,探讨SCF干预对高糖环境中已发生形态、机能变化的豚鼠膀胱Cajal样间质细胞表型、功能逆转的可能性和可行性。方法：本实验通过胶原酶酶解法分离、提取、纯化豚鼠膀胱Cajal样间质细胞并培养24小时后,分别加入不同葡萄糖浓度(15mmol/L、30mmol/L)培养基继续培养72小时后(c-kit明显降低时期),然后分别加入不同SCF浓度(50ng/ml、100ng/ml)培养基培养24小时或72小时。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测膀胱Cajal样间质细胞c-kit mRNA含量；应用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测膀胱Cajal样间质细胞c-kit蛋白表达。结果：豚鼠膀胱Cajal样间质细c-kit mRNA含量和蛋白表达各单纯高糖对照组均比正常对照组明显下降(P<0.01)；24小时组,SCF50ng/ml干预组c-kit mRNA含量和蛋白表达较高糖15mmol/L对照组无差异(P>0.05),SCF100ng/ml干预组c-kit mRNA含量和蛋白表达较15mmol/L高糖对照组升高(P<0.05),SCF50ng/ml、SCF100ng/ml干预组c-kit mRNA含量和蛋白表达较30mmol/L高糖对照组均无差异；72小时组,SCF50 ng/ml、SCF100ng/ml干预组c-kit mRNA含量和蛋白表达均较15mmol/L高糖对照组明显升高(P<0.01),SCF50ng/ml、SCF100ng/ml干预组c-kit mRNA含量和蛋白表达较30mmol/L高糖对照组升高(P<0.01)。结论：微环境高糖环境可导致体外培养的豚鼠膀胱Cajal样间质细胞c-kit表达下降,从而使SCF/c-kit信号通路受阻,在微环境中加入高浓度SCF刺激后,可促进高糖环境中已发生形态、机能变化的豚鼠膀胱Cajal样间质细胞c-kit重新表达,从而促进SCF/c-kit信号通路恢复,以维持豚鼠膀胱Cajal样间质细胞表型和功能。从分子生物学水平证明微环境中高浓度SCF干预对高糖环境中已发生形态、机能变化的豚鼠膀胱Cajal样间质细胞c-kit表达有促进作用,并与微环境中SCF的干预时间和浓度可能有密切的联系。