本文对注射用核介素药代动力学进行了研究，研究工作分为两部分： 第一部分：建立高效液相色谱-质谱联用的方法，测定犬血浆、大鼠组织(包括心、脑、胃、肾、脾、肺、肝、脂肪、骨骼肌、小肠、睾丸)以及排泄物(包括尿、胆汁、粪便)中白屈菜红碱的浓度，为注射用核介素的药代动力学研究奠定基础。 研究方法： ①生物样品的处理：血浆：取血浆样品0.2ml，加入内标溶液，旋涡混合2分钟，加入60μl10％的三氯醋酸溶液混悬1分钟，离心12000rpm×10分钟，取上清50μl进样。 组织：取各组织样品(心、脑、胃、肾、脾、肺、肝、脂肪、骨骼肌、小肠、睾丸)称重0.5g，加入5ml生理盐水制成匀浆后离心，取上清液0.2ml，加入内标溶液，旋涡混合2分钟，加入60μl10％的三氯醋酸溶液混悬1分钟，离心12000rpm×10分钟，取上清50μl进样。 排泄物：取胆汁、尿和粪便预处理液(0.5g粪便加入生理盐水5ml制成匀浆，离心取上清)各0.2ml，加入内标溶液，旋涡混合2分钟，加入60μl10％的三氯醋酸溶液混悬1分钟，离心12000rpm×10分钟，取上清50μl进样。 ②色谱条件：选择色谱柱AgilentC18分析柱(2.1×50mm5u)，调整流动相的组成、配比和流速使白屈菜红碱色谱峰完全分离。质谱条件为电喷雾离子源(ESI)，干燥气(N2)流速：260L/hr，毛细管电喷雾电压：3.0KV，锥孔(cone)电压：30V，锥孔提取电压(extractor)：5.0V，电离源温度：115℃，脱溶剂气温度：250℃，确定离子检测方式，确定最佳选择离子。 ③标准曲线和线性范围：配制系列浓度的白屈菜红碱对照品溶液，进样测定，以白屈菜红碱的浓度为横坐标，白屈菜红碱峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线。 ④回收率及精密度试验：取空白血浆分别加入不同浓度的白屈菜红碱标准溶液，配制成高、中、低三个浓度的样品，每个浓度5份，按“生物样品处理”项下方法处理后进样，记录峰面积。 ⑤重现性试验：取空白血浆加入不同浓度白屈菜红碱标准溶液，配制成高、中、低三个浓度的样品，每个浓度5份，按“生物样品处理”项下方法处理后进样，考察方法的日内、日间重现性。 ⑥灵敏度：以信噪比S/N(3：1)时相应的白屈菜红碱的浓度为最低检测浓度。 ⑦样品的稳定性考察：考察血浆样品在冷冻、反复冻融、处理前、后在室温放置等条件下样品的稳定性。 研究结果： ①色谱条件的确定：通过试验确定最佳色谱条件为：C18分析柱(2.1×50mm5u)，柱温：30℃；流速：0.25ml/min；流动相：乙腈：水(含0.75％乙酸)=30：70。通过试验确定采用正离子检测方式，选择性离子为m/z：384.1(白屈菜红碱[M+H]+)，m/z：354.0(白屈菜碱[M+H]+)。 ②标准曲线绘制：犬血浆中白屈菜红碱在50-6400ng/ml的浓度范围内呈现良好的线性关系，相关系数0.9997；大鼠各组织和排泄物中白屈菜红碱在不同浓度范围内均呈现良好的线性关系，相关系数均大于0.9960。 ③回收率及精密度试验：在犬血浆和大鼠各组织中白屈菜红碱的高、中、低三个浓度的平均回收率和RSD分别为96.0％(2.52)，87.5％(2.29)，92.3％(5.05)；在大鼠各组织和排泄物中，白屈菜红碱的高、中、低三个浓度的回收率良好，RSD％小于10％ ④重现性试验：白屈菜红碱在血浆中的日内和日间重现性良好，高、中、低三个浓度的日内和日间的RSD％分别小于8％和10％。 ⑤灵敏度：犬血浆中的最低检测限为5ng/ml，在大鼠的组织及排泄物中的最低检测限为0.5ng/ml。 ⑥样品稳定性考察：样品在室温放置、冷冻及反复冻融条件下稳定，室温放置24小时、冷冻储藏4周及反复冻融4次后，变异小于10％，说明样品在上述条件下稳定。 研究结论：本文建立了注射用核介素中白屈菜红碱在犬血浆、大鼠的组织、胆汁、尿液和粪便中的HPLC-MS测定方法，方法的专属性好，灵敏度高，准确性好；生物样品的制备过程简便，容易操作.该方法适用于注射用核介素药代动力学的研究。 第二部分：观测注射用核介素在Beagle犬及大鼠体内的药代动力学，为临床应用作参考。 研究方法： 1.犬血浆样品的处理：Beagle犬9条，随机分为3组，小剂量组3只、中剂量组3只、大剂量组3只。三组分别静脉注射注射用核介素1、3及9mg/kg，于给药后2、5、10、30、60、180、300、600、1440min分别取血，分离血浆备用。 取0.2ml血浆，按照血浆样品处理方法处理后直接进样。从血浆标准曲线计算犬血浆中白屈菜红碱的浓度。采用药代动力学软件3P87程序，以3条犬各个相应时间的血药浓度计算药代动力学参数。 2.大鼠组织样品的处理：大鼠10只，每5只大鼠为一组，静脉注射注射用核介素3mg/kg，分别于用药后5分钟及2小时断头处死，放血后取其心、肝、脑、肾、脾、胃、小肠、睾丸、脂肪、骨骼肌和肺，称重0.5g，加5ml生理盐水制成匀浆后，3000rpm，离心10分钟，取上清液0.2ml，按组织样品的处理方法处理后，取上清液50μl，直接进样。计算每克组织的药物含量。 3.大鼠排泄物的处理：大鼠6只，收集空白尿和粪后，静脉注射注射用核介素3mg/kg，收集给药后1、5、10、24小时的尿和粪。取不同时间的尿液作为尿样预处理液。取不同时间的粪便称重后，研磨均匀，取0.5g加5ml生理盐水制成匀浆后，取上清液作为预处理液。 大鼠10只在乙醚麻醉下进行胆管插管，收集空白胆汁，静脉注射注射用核介素3mg/kg，收集给药后1、5、10、24小时的胆汁。取不同时间的胆汁作为胆汁预处理液。 分别取胆汁、尿和粪预处理液0.2ml，按胆汁、尿和粪样品的处理方法处理后，直接进样测定白屈菜红碱含量。计算不同时间的排泄量和排泄率及24小时内总排泄量和排泄率。 研究结果： 1.犬血浆中白屈菜红碱的浓度：给犬静脉注射注射用核介素后，血中白屈菜红碱迅速达峰浓度，消除半衰期平均约为47分钟，所静注的三个剂量组，AUC分别为12.5、55.6及122.4(mg/L)min，清除率分别为0.086、0.067及0.088L/kg/min。静注后，白屈菜红碱的血药浓度-时间曲线呈二室模型 2.大鼠组织中白屈菜红碱的分布：大鼠静脉注射注射用核介素后，药物在所测定的各组织中均有分布，其中以肺脏、肾脏和脾脏分布最多，心脏和小肠分布较少。 3.大鼠体内白屈菜红碱的排泄：大鼠以注射用核介素3mg/kg静脉注射后24小时，在尿、粪和胆汁中白屈菜红碱排泄总量分别为注射剂量的0.004％、0.004％和0.010％。 研究结论：注射用核介素给犬注射后，血药浓度迅速达到峰值，但消除也很快，从血药浓度-时间曲线和药动学参数可知，白屈菜红碱在体内呈二室模型；注射用核介素给大鼠静脉注射后，在大鼠体内组织分布广，其中以肾脏、肺脏和脾脏分布最多，心脏和小肠分布较少；在注射24小时后，药物从尿、便和胆汁以原型排泄极少，可能在体内发生代谢转化。