论文部分内容阅读
目的:通过检测乙肝病毒携带者（ASC）乙肝病毒（HBV）的增殖情况和外周血单个核细胞（PBMC）TLR2、4的表达与活化情况,以探讨HBV增殖与TLR2、4表达水平的相关性,从而为进一步了解机体抗乙肝病毒感染的免疫功能状态及今后开展免疫治疗研究提供依据。方法:采集乙肝病毒携带者和健康志愿者静脉血,分三部分进行实验:第一部分非抗凝血样本分离血清,通过时间分辨荧光免疫分析两对半、肝功能分析仪检测肝功能、荧光定量PCR检测HBV DNA拷贝数,结果用于分组:即HBeAg（+）组、HBeAg（-）组、正常对照组;第二部分抗凝血用OptiprepTM混合法分离PBMC:分别以TLR2、4抗体作为一抗,用免疫细胞化学方法（ICC）染色测定PBMC表面TLR2、4蛋白水平的表达情况,再以RT-PCR方法测定PBMC TLR2 mRNA的表达情况;第三部分非抗凝血样本分离血清,检测TLR活化产物TNF-α的表达水平。结果:（1）乙肝病毒携带者体内HBeAg的状态与HBV DNA的拷贝数存在相关性:ttBeAg（+）组伴随高水平的HBV DNA拷贝数,而HBeAg（-）组伴随较低水平的HBV DNA拷贝数,以此作为分组依据（r=0.760,P=0.000）。（2）外周血单个核细胞TLR2的细胞阳性率和蛋白表达水平:HBeAg（+）组PBMC TLR2的表达均明显低于HBeAg（-）组和正常对照组,差异有统计学意义（P=0.004,P=0.003;P=0.000,P=0.000）;同时外周血单个核细胞TLR2 mRNA的RT-PCR结果与免疫细胞化学的结果一致:HBeAg（+）组PBMC TLR2 mRNA的表达水平明显低于HBeAg（-）组与正常对照组,差异有统计学意义（P=0.000,P=0.000）;而外周血单个核细胞TLR4的免疫细胞化学结果显示,三组间无显著性差异（P＞0.05）。（3）血清中TNF-α表达水平为HBeAg（-）组明显高于HBeAg（+）组,差异有统计学意义（P=0.000）;同时HBeAg（+）组明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P=0.000）。结论:（1）乙肝病毒携带者外周血单个核细胞TLR2的表达及活化与乙肝病毒的增殖有相关性:HBeAg阳性的乙肝携带者体内病毒复制活跃、病毒DNA拷贝数高,与外周血单个核细胞TLR2的表达下调有关;相反,HBeAg阴性的乙肝携带者体内病毒复制相对不活跃、病毒DNA拷贝数低,与外周血单个核细胞TLR2的正常表达和活化上调有关。（2）乙肝病毒携带者外周血单个核细胞TLR4的表达和活化水平与乙肝病毒复制和增殖无显著相关性。