前言:　　内脏痛(Visceral pain，VP)是临床上常见的疼痛现象，常伴有情绪和防御反应。其明显特征是对切割、灼烧等刺激不敏感，而对机械牵拉、缺血、炎症等刺激比较敏感。内脏痛发生缓慢、持久、且定位不清，持续的内脏痛可以引起痛觉过敏。内脏痛给人类带来巨大的痛苦，但其机制十分复杂，是临床研究和基础研究的一大难题。　　维生素D受体（Vitamin D receptor,VDR）是核受体家族的一员，广泛存在于各种组织和器官中，受活化形式的维生素D-1，25(OH)2D3调控。1，25(OH)2D3-VDR通路的激活有多种功能，除了调节水盐代谢、骨钙代谢外，还参与调控脂代谢、糖代谢、免疫应答等，此外还可通过调节肾素-血管紧张素系统对心血管、肾、脑、肺以及动物的行为等功能进行调控。　　最近有22项研究显示慢性痛与维生素D缺乏相关。特别是Harri等人最新的研究显示:疼痛患者经过3周日光照射治疗，随着患者血清维生素D水平的提高，肌肉、骨痛的疼痛程度有所减轻。尽管部分流行病学调查研究表明维生素D可以减轻各种疼痛如关节痛、骨痛、肌肉痛、神经痛等，但其对疼痛的调节作用尚未被肯定，机制亦不清楚。　　本课题的预实验结果显示急性内脏痛小鼠脑内VDR表达较正常小鼠低，提示VDR参与内脏痛的生理过程，为了进一步为明确维生素D及VDR在急性内脏痛过程中的作用，利用腹腔注射维生素D类似物（paricalcitol，Pari）构建VDR高表达小鼠模型;用1％醋酸诱导VDR高表达小鼠及VDR敲除小鼠急性内脏痛，通过对行为学观察、评估及Western blot、RT-PCR、免疫荧光等分子生物学技术手段，探究VDR在急性内脏痛过程中的作用及可能存在的调节机制，为临床内脏痛的治疗提供新方向，新靶点。　　实验方法:　　1、动物模型构建及分组:　　腹腔注射paricalcitol2周诱导VDR高表达小鼠模型(pari组);腹腔注射60％丙二醇2周的构建安慰剂组小鼠（PE组）;腹腔注射1％醋酸盐溶液诱导急性内脏痛小鼠（疼痛组）;腹腔注射生理盐水构建对照组小鼠（对照组）;VDR敲除小鼠（VDR敲除组）;野生组小鼠（野生组）。　　2、行为学的观察:　　记录以上各种小鼠开始扭体时间（潜伏期）及第一次扭体开始后15分钟内的扭体数，评价内脏痛痛觉程度。　　3、分子水平的检测:　　利用realtime-PCR、Westernblot、免疫荧光检测小鼠脑、脊髓组织VDR、c-fos、SubstanceP(SP)、somatostatin(SS)等分子水平的改变。　　4、统计分析:　　实验结果除免疫荧光结果外均用均数±标准差（X±S）来表示，用t检验对各组差异进行比较，以P＜0.05定义为差异有统计学意义，以上统计学分析在SPSS.16.0软件进行。　　实验结果:　　一、用1％醋酸诱导内脏痛时，VDR高表达小鼠不易引起痛感，VDR敲除小鼠痛感强烈　　1、VDR高表达小鼠的行为学观察:　　用1％醋酸诱导急性内脏痛小鼠模型时，发现VDR高表达组小鼠较安慰剂组小鼠扭体数明显减少(46.07±15.63次/60.00±16.67次)，差异有统计学意义，P＜0.05，提示VDR高表达小鼠不易引起痛感;但两组小鼠扭体潜伏期差异不显著，无统计学意义。　　2、VDR敲除小鼠的行为学观察:　　对VDR敲除小鼠及同背景的野生鼠诱导急性内脏痛模型时，发现VDR敲除小鼠扭体数明显多于野生鼠(53.67±2.31次/30.00±11.53次)，痛感明显，差异有统计学意义，P＜0.05。VDR敲除组小鼠扭体潜伏期较野生组扭体潜伏期短，差异有统计学意义（3.40±0.17min/5.17±0.76min）。　　二、小鼠脊髓、脑VDR表达受急性内脏痛的负反馈调节　　1、小鼠脊髓VDR的表达变化:　　1％醋酸诱导内脏痛后，分别于0h、2h、6h、12h、24h检测小鼠脊髓VDR的表达水平，发现随时间推移两组小鼠脊髓表达均上调，且脊髓的VDR表达上调明显先与脑VDR表达上调，Pari组注射致痛物质开始扭体时脊髓既已经有一定水平的VDR表达，在注射致痛物质12h后PE组和Pari组脊髓VDR表达达峰值，随后开始下降。　　2、小鼠脑VDR的表达变化:　　1％醋酸诱导内脏痛后，分别于0h、2h、6h、12h、24h检测小鼠脑VDR的表达水平，发现随时间推移两组小鼠脑VDR表达均上调。而Pari组注射致痛物质开始扭体时脑内既已经有一定水平的VDR表达。在注射致痛物质12h24h后，PE组小鼠脑VDR反馈性增高，近VDR高表达小鼠水平。　　三、VDR在小鼠脊髓后根、脑内侧缰核、丘脑的神经元细胞核表达　　1、VDR的脊髓定位:　　通过免疫荧光染色定位检测，VDR在小鼠脊髓后根表达，且Pari疼痛组小鼠脊髓后根VDR表达显著高于PE疼痛组。　　2、VDR的脑定位:　　急性内脏痛时，VDR在小鼠脑内侧缰核、丘脑均有表达，其中Pari疼痛组小鼠内侧缰核表达的VDR显著多于PE疼痛组小鼠，且所有表达的VDR均位于神经元的细胞核。　　四、急性内脏痛时，VDR高表达组与安慰剂组小鼠脊髓后根SS、SP的表达差异　　1、SS表达差异:　　小鼠急性内脏痛时，脊髓后根SS显著高表达，高于对照组，但两疼痛组的组间差别不明显。　　2、SP的表达差异:　　急性内脏痛时，小鼠脊髓后根SP显著高表达，高于其对照组，且Pari疼痛组SP表达显著高于PE疼痛组。　　五、VDR高表达疼痛组小鼠大脑内侧缰核表达c-fos的神经元显著多于其对照组　　Pari疼痛组小鼠内侧缰核表达c-fos神经元显示多于其对照组，提示VDR高表达小鼠接受1％醋酸腹腔刺激时，内侧缰核感觉神经元被高度兴奋。　　实验结论:　　维生素D受体参与小鼠急性内脏痛的调节;VDR表达高，不易引起痛感，VDR表达低或不表达，痛感强烈;且VDR的表达受内脏痛的负反馈调节;VDR对急性内脏痛的调节作用机制可能与促进脊髓背根P物质表达有关，而与生长抑素无关;VDR对急性内脏痛的中枢调节可能是通过兴奋痛阈中枢内侧缰核，提高痛阈而发挥作用。