作为第一个动物专用的头孢菌素类抗生素-头孢噻呋（ceftiofur）,由于其在兽医临床上的日益广泛使用,其在动物性食品中的残留已逐渐引起人们的高度关注。为了研制头孢噻呋残留快速检测试剂盒,我们制备了头孢噻呋的单克隆抗体,研究了其ELISA检测方法,为试剂盒的研制打下了基础。同时也对头孢噻呋残留检测方法中常用的高效液相检测方法作了初步探索。 本实验以人工合成的头孢噻呋免疫原免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备了5株能稳定分泌抗头孢噻呋单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对单抗进行纯化鉴定并初步建立了检测头孢噻呋的竞争ELISA方法。 首先,实验采用直接交联法、戊二醛法、碳二亚胺法、马来酰胺活化法等合成方式合成了头孢噻呋免疫原（KLH-SMCC-DESCEF、CEF-BSA）和包被原（BSA-S-GMBS-CEF、CEF-HSA）。抗原经紫外扫描分析法进行定性判定。结果表明:载体蛋白在交联半抗原的前后其吸收光谱发生了明显的改变;定性分析结果显示头孢噻呋人工抗原合成成功。小鼠免疫实验也证明了抗原的合成是成功的。 用合成的免疫原（KLH-SMCC-DESCEF、CEF-BSA）与等量的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂乳化后,按100μg/只的剂量,采用两种不同的免疫程序免疫BALB/C小鼠。间接ELISA检测表明:四种方法合成的两种免疫原均不同程度的产生了抗血清,其中以免疫程序—中戊二醛法合成的CEF-BSA的免疫效果最好。抗血清效价在1∶100000以上,而且对头孢噻呋的竞争抑制试验作用明显,将其用于细胞融合制备单克隆抗体。 利用细胞融合技术,用50%PEG将小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用间接ELSIA法和间接竞争ELSIA法,利用有限稀释法克隆技术,经过4次的克隆和筛选,共筛选到5株能稳定分泌目的抗体的杂交瘤细胞株。用培养扩增后的各建株细胞诱导小鼠生长腹水,腹水效价均可达10^-4～10⁶。 亚型鉴定结果表明3B₃株单克隆抗体属于IgM亚型。用优球蛋白沉淀法纯化单克隆抗体