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糖皮质激素(GC)通过特异性受体(GRs)信号途径调节免疫细胞机能是牛围产期免疫抑制形成/解除的重要机制之一。淋巴细胞(LYM)作为适应性免疫系统的重要细胞群,其GR表达状况及其介导的细胞效应,特别是是否存在非特异性受体交叉介导GC的细胞效应目前尚不清楚。为了探讨并初步阐明在围产牛外周LYM免疫抑制形成/解除的动态过程中,除GR信号途径外,P4受体(PRs)的表达特征及其在介导GC过程中的信号转导作用,本研究以蒙古牛为研究对象,采用RT-qPCR和Western Blot方法分别检测围产期、阉牛体内注射和DEX体外诱导外周LYM的GRs、PRs和细胞效应信号TLR2、TLR4与NF-κB,从而通过三种环境条件下的比较分析,为充分围产期复杂生理状态下外周GC对LYM免疫活性的调节及其受体信号途径提供新的理论证据。 1.围产牛:选围产蒙古牛3头,于-14d,-10d,-7d,-3d,-1d,0d,1d,3d,7d,10d,14d颈静脉采血、分离LYM。mRNA丰度分析表明:GRα、GRβ、PR、PRB、mPRα、mPRβ、mPRγ、PGRMC1和TLR2变化规律相似,产前表达呈下降趋势,产后呈时间依赖性上调;TLR4、MyD88和NF-κB产前表达呈上升趋势,产后逐渐下降后稳定表达;同时Western Blot检测显示GR、PR、mPRβ产前表达呈下降趋势,产后呈上升趋势,PGRMC1,TLR2,NF-κB产前表达呈下降趋势,产后呈上升趋势。 2.阉牛体内注射:分别于注射DEX后15m、30m、1h、4h和8h采血分离LYM。mRNA丰度分析表明:体内注射DEX后上调GRα、GRβ、TLR4、MyD88和NF-κB表达,下调PR、PRB、mPRα、mPRβ、mPRγ、PGRMC1和TLR2表达;Western Blot检测显示,GR、PRA、PRB、mPRα和mPRγ蛋白表达显著下降,mPRβ、PGRMC1、TLR2、TLR4和NF-κB蛋白表达显著上升,MyD88蛋白表达无明显变化。 3.体外诱导:选取4ng/mL、16ng/mL DEX,建立LYM培养体系,于培养15m、30m、1h、4h和8h检测基因和蛋白。mRNA丰度分析表明:低浓度DEX下调GRα、GRβ、PRB、mPRα、mPRβ、TLR2和MyD88的表达下调,上调PGRMC1、TLR4和NF-κB的表达;与LPS共培养后,GRα、GRβ、PR、PRB、mPRα、mPRβ、PGRMC1、MyD88表达下调,TLR2短时间内表达上调,TLR4和NF-κB表达上调;再与RU486共培养后,GRα不变;下调GRβ、PR、PRB、mPRα、mPRβ表达,上调PGRMC1、TLR2、TLR4、MyD88和NF-κB表达;高浓度DEX下调GRα、GRβ、 PRB、mPRα、mPRβ、TLR2和MyD88的表达下调,上调GRβ、PRB、PGRMC1、TLR4、MyD88、和NF-κB的表达;与LPS共培养后,下调GRα、GRβ、PRB、mPRα、mPRβ、PGRMC1、MyD88表达,上调PR、PGRMC1、TLR4和NF-κB表达上调,短时间内上调TLR2表达;再与RU486共培养后,下调GRβ、PR、PRB、mPRα、mPRβ和TLR2表达,上调GRα、PGRMC1、TLR4、MyD88和NF-κB表达;同时Western Blot检测显示,GRα、GRβ、PRB、mPRα、mPRβ、TLR2和MyD88的表达下降,PGRMC1、TLR4和NF-κB的表达上升;添加LPS后,PRA、PRB、mPRα、mPRβ、TLR4和NF-κB蛋白表达显著增加,而GR表达显著下降;添加RU486后GR、PRA、PRB表达下降,mPRα、 mPRβ、mPRγ、PGRMC1、TLR2、TLR4、MyD88和NF-κB表达显著增加。 以上结果表明,外周LYM表达GRα、GRβ、PRA、PRB、mPRα、mPRβ、mPRγ和PGRMC1,并且PRA、PRB、mPRα、mPRβ、mPRγ和PGRMC1能够介导GC对外周LYM的诱导效应。