新型抗菌肽与磷脂膜的相互作用研究

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抗菌肽的主要作用位点是细菌细胞膜的骨架——磷脂双分子层,由于磷脂酰胆碱(DMPC)和磷脂酰甘油(DMPG)分别为构成动植物细胞膜和细菌细胞膜的重要磷脂,因此本论文分别采用DMPC和DMPG来模拟动植物细胞膜和细菌细胞膜,研究抗菌肽对不同细胞的破膜效果。本研究从头设计了三组新型抗菌肽,并采用电化学法,荧光淬灭法以及理论计算模拟的方法对三组抗菌肽与磷脂之间的相互作用进行了研究,研究结果如下:采用KFNFK、KFSFK、KFTFK为活性片段设计含有单活性序列的短链多肽、含有双活性序列的线型肽和环状肽,并对该组多肽和磷脂的相互作用进行了研究。计算模拟的结果表明,双活性序列抗菌肽能够提供较单活性序列肽多的正电荷氨基酸与DMPG负电头基形成静电吸引,因此具有较高的结合能,而环状肽因为其较为固定的构型和序列较短使得其结合能低于线型肽。以固体支撑双层膜模拟生物膜,采用电化学方法研究了所设计多肽与磷脂之间的相互作用,结果显示,抗菌肽无论与DMPC还是DMPG进行作用,具有双活性序列的抗菌肽较单活性序列抗菌肽更易对磷脂发生破坏作用;抗菌肽对DMPG的破坏作用的程度较DMPC更易受到抗菌肽浓度的影响。采用从抗菌肽库中搜索所得到的短链多肽RRWWRF和FRWWHR为活性序列设计含单活性序列的短链肽和含双活性序列的线型肽和环状肽,并对多肽与磷脂的相互作用进行研究。理论计算的结果显示,双活性序列抗菌肽的结合能大于单活性序列抗菌肽,双活性序列抗菌肽更易于DMPG结合;电化学实验结果显示,第二组抗菌肽只能对DMPC产生破坏作用,而对DMPG基本上不具有破坏作用。因此推测第二组抗菌肽并不是通过对细菌细胞膜产生破坏作用而杀菌,而是与细菌细胞膜上的磷脂产生相互作用并进入到细胞膜内部,与细胞内物质产生相互作用而使细菌死亡。采用RFTFR、RWTWR、KWTWK为活性片段设计含有单活性序列的短链多肽和含有双活性序列的线型肽,并对该组多肽和磷脂的相互作用进行了研究。计算模拟的结果显示双活性序列的抗菌肽具有较单活性序列抗菌肽高的结合能,更易与DMPG结合。电化学实验结果显示,双活性序列抗菌肽能够与DMPC和DMPG发生作用使膜破裂,而单活性序列抗菌肽则基本不与DMPC和DMPG产生作用;抗菌肽对DMPG的破坏作用较DMPC大。荧光淬灭实验结果显示,短链肽基本不能插入到DMPG和DMPC产生相互作用,而线型肽均能插入到DMPG中却不能插入到DMPC中。
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