【摘 要】
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近年来,随着科学技术的发展,DNA检测技术变得越来越重要。传统的凝胶电泳法劳动强度大,消耗时间长。在这种情况下,以碱基配对为基础的DNA生物传感器应运而生。其中,DNA荧光传
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近年来,随着科学技术的发展,DNA检测技术变得越来越重要。传统的凝胶电泳法劳动强度大,消耗时间长。在这种情况下,以碱基配对为基础的DNA生物传感器应运而生。其中,DNA荧光传感器由于其高灵敏度、低成本及简便性等特点受到了越来越多的关注。基于此,我们构建了四种DNA荧光传感器。第一种是将共价连接到硅基芯片表面的吗啉寡核苷酸作为捕获探针,与DNA片段杂交后,利用锆离子的配位作用,将罗丹明B连接到DNA骨架上,通过荧光成像分析的方法实现DNA片段的检测。第二种是将共价连接到磁纳米粒子表面的吗啉寡核苷酸作为捕获探针,与较长链的待测DNA片段杂交后,待测DNA的未杂交段再与生物素酰化的信号探针DNA杂交,利用亲和素-生物素相互作用,将碱性磷酸酶结合到信号探针DNA末端,碱性磷酸酶催化L-抗坏血酸2-磷酸盐生成L-抗坏血酸,L-抗坏血酸再还原刃天青形成强荧光的试卤灵,通过荧光光谱分析的方法实现DNA片段的检测。第三种是将吗啉寡核苷酸固定到磁纳米粒子表面,与目标DNA片段杂交后,利用锆离子的配位作用,将1-芘丁酸连接到DNA骨架上,再利用金丝桃素与1-芘丁酸之间的π-堆积作用引入荧光较强的金丝桃素。第四种是将捕获DNA的3’端固定到磁纳米粒子表面,与目标DNA片段杂交后,末端转移酶对目标DNA的3’端进行加尾,生成聚胸腺嘧啶,铜离子可以与聚胸腺嘧啶相互作用,抗坏血酸钠将二价铜还原成一价铜,一价铜再歧化形成荧光铜纳米粒子附着在DNA模板上,以上几种体系均具有较高的灵敏度,操作简便,可应用于分子识别、临床诊断、环境监测及食品安全等领域。
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