论文部分内容阅读
CADMs (cell adhesion molecules)家族是一类脊椎动物特有的多功能细胞黏附因子。由于其具有介导免疫肥大细胞识别和黏附靶细胞的功能,在脊椎动物构建抵御病害感染的第一道防线中发挥重要作用。为研究CADMs在草鱼构建抵御病害感染的第一道防线中起作用,我们克隆了草鱼cadm2b的mRNA。用RT-PCR和RACE方法结合测序分析,我们在草鱼脑组织中检测到了该基因4条不同的cDNA全长序列。序列比对结果表明这4条全长cDNA在5’端的序列完全相同,在3’端的3个局部区域有不同片段的缺失。因此,可以确定这4条不同的mRNA是cadm2b的不同剪接体。这4条不同的剪接体被分别命名为cadm2b、 cadm2bX2、cadm2bX3和cadm2bX6、cadm2b的cDNA序列全长1669bp,开放阅读框(ORF)1203bp,编码400个氨基酸。cadm2b X2的cDNA序列全长2783bp,开放阅读框长1323bp,编码440个氨基酸;cadm2b X3的cDNA序列全长2755bp,开放阅读框1296bp,编码431个氨基酸；cadm2b X6基因的cDNA序列全长2649bp,开放阅读框1161bp,编码386个氨基酸。根据碱基序列所进行的氨基酸序列和蛋白结构预测显示这四个CADM2b蛋白亚型都具有CADM家族保守的4个功能区,但其C端的蛋白结合位点存在差异。CADM2b具有近膜4.1蛋白结合位点和Ⅱ型PDZ蛋白结合位点,CADM2bX2、X3缺失了PDZ蛋白结合位点,而CADM2bX6则同时缺失4.1蛋白和PDZ蛋白的结合位点。实时定量RT-PCR检测结果显示cadm2b剪接突变体是该基因mRNA的主要形式。半定量RT-PCR和套式PCR实验检测结果表明cadm2b基因在草鱼成体脑中高水平表达,在肝、肾、心脏和肌肉组织中有微量表达。这种表达模式提示草鱼中CADM2b主要是由非免疫细胞,而不是由免疫肥大细胞合成分泌的细胞粘附因子,可能通过介导免疫肥大细胞与病原靶细胞的黏附而起非特异性抵御病害感染的作用。