论文部分内容阅读
目的:通过观察培元化瘀方含药血清对人微血管内皮细胞（HEMC-1）的增殖、迁移和基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9、血管内皮生长因子VEGF的蛋白表达的影响,探讨培元化瘀方对慢性硬膜下血肿（CSDH）外膜微血管形成的影响、以及局部抗炎作用的可能机制,为临床中医药治疗CSDH、降低术后复发率提供依据。方法:实验一,采用随机数字表法将30只8周龄SPF级雄性Wista大鼠分为5组,每组6只,分别是空白对照组、培元化瘀方0.5h、1h、1.5h、2h组。适应性喂养一周后,除空白组外,给予培元化瘀方12g/kg/d灌胃3天,并于第三天灌胃后0.5h、1h、1.5h、2h后采取各组大鼠含药血清,每组抽取一个样本的血清采用高效液相色谱法对含药血清进行川芎嗪成分鉴定,验证培元化瘀方含药血清是否制备成功。实验二,培元化瘀方含药血清成功制备后,暂存-20℃冰箱保存备用。购买人微血管内皮细胞（HMEC-1）,使用内皮细胞专用培养基于5%CO2,37℃培养箱中培养,取对数生长期细胞铺板,用培元化瘀含药血清和空白血清对细胞干预,进行细胞的增殖实验（cck-8）、细胞划痕实验,体外血管生成实验评估培元化瘀含药血清对细胞的增殖、迁移和血管生成的影响,Western blot测定HMEC-1中VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达情况,评估用药前后MMP-2和MMP-9在HMEC-1的表达情况以及培元化瘀含药血清对VEGF表达的影响。收集整理实验数据,进行分类汇总分析。结果:实验一结果提示,末次灌胃后1.5h组所取含药血清川芎嗪含量较其他组高,证明本次培元化瘀方含药血清制备成功;实验二中,（1）细胞增殖实验（CCK-8）结果发现,与空白血清组和阴性对照组相比培元化瘀方含药血清组对细胞生长呈抑制作用,在血清浓度为15%时存在OD值最低;（2）细胞划痕愈合实验结果显示,培元化瘀方含药血清组24h迁移距离小于空白血清组;（3）体外血管生成实验中,培元化瘀含药血清干预细胞3h后,三组的成管面积和管腔数量差异不明显,12h后,药物组管腔数量和管腔面积均小于空白组。（4）Western blot实验中,培元化瘀方含药血清干预后的MMP-2、MMP-9略低于空白血清组,VEGF蛋白表达远低于空白血清组。结论:含药血清制备时,末次灌胃1.5h时腹主动脉采集的含药血清中川芎嗪含量较高;培元化瘀方含药血清可抑制HMEC-1细胞的增殖、迁移作用,抑制新生血管的生成,降低HMEC-1细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达。