【摘 要】
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本文对陕西合阳新鲜采摘的牡丹花瓣进行冷冻干燥,为提高其利用度采用破壁技术进行处理,用显微计数法检测牡丹花瓣冻干极细粉的破壁率;分析测定牡丹花瓣冻干极细粉的营养成分、建立HPLC法测定了牡丹花瓣冻干极细粉中6种化学成分的含量;因其主要含有酚类、黄酮类等成分,为进一步开发和应用,建立了小鼠急、慢性酒精性肝损伤模型,评价了牡丹花瓣冻干极细粉对酒精性肝损伤的防治作用。实验一:牡丹花瓣冻干极细粉的制备和细胞
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本文对陕西合阳新鲜采摘的牡丹花瓣进行冷冻干燥,为提高其利用度采用破壁技术进行处理,用显微计数法检测牡丹花瓣冻干极细粉的破壁率;分析测定牡丹花瓣冻干极细粉的营养成分、建立HPLC法测定了牡丹花瓣冻干极细粉中6种化学成分的含量;因其主要含有酚类、黄酮类等成分,为进一步开发和应用,建立了小鼠急、慢性酒精性肝损伤模型,评价了牡丹花瓣冻干极细粉对酒精性肝损伤的防治作用。实验一:牡丹花瓣冻干极细粉的制备和细胞破壁率及其营养成分检测。新鲜牡丹花瓣采摘后速冻(-18℃),粗粉碎,冷冻干燥机干燥,粉碎,过80目筛得细粉,再在0℃以下条件超微粉碎,过300目筛,得牡丹花瓣冻干极细粉(10℃以下条件保存)。采用细胞计数法,以牡丹花瓣细粉的薄壁细胞为评价指标,测定牡丹花瓣冻干极细粉的细胞破壁率;其营养成分按照中华人民共和国卫生部食品安全国家标准相关实验方法和要求进行检测。结果表明,牡丹花瓣经冷冻干燥、粉碎后获得冻干极细粉,测得细胞破壁率达100%;其中富含蛋白质、维生素C、人体必需氨基酸和化学元素等多种营养成分。实验二:检测了牡丹花瓣冻干极细粉中6种化学成分的含量。牡丹花瓣冻干极细粉加入适量超纯水,搅拌均匀使其分散溶解,超声提取20 min,静置后,用微孔滤膜过滤,按照建立的HPLC方法,进样检测其含量。结果表明没食子酸、羟基芍药苷、芍药苷、野漆树苷、紫云英苷和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量依次为4.29-5.00mg/g、2.13-3.32 mg/g、1.27-1.81 mg/g、2.92-3.75 mg/g、7.14-7.80 mg/g和3.12-3.75 mg/g之间。实验三:牡丹花瓣冻干极细粉防治小鼠急性酒精性肝损伤的作用。80只小鼠随机分成对照、模型、联苯双酯、牡丹花瓣冻干极细粉不同剂量等共8组,每组10只。对照组与模型组小鼠灌胃等容量蒸馏水,其余组依次灌胃150 mg/kg联苯双酯和20mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg、160 mg/kg、320 mg/kg牡丹花瓣冻干极细粉,每天1次,连续10天。于末次给药后30 min,除对照组小鼠外,其余各组灌胃体积分数为15 m L/kg的56度红星二锅头白酒(简称白酒)。结果表明,牡丹花瓣冻干极细粉各组小鼠血清中AST、ALT的含量均显著降低并呈现一定剂量效应,即随剂量增加其含量降低更明显;肝和胃系数基本处于正常水平;肝组织中TG、MDA含量明显低于模型组,而ADH和SOD含量显著高于模型组;胃组织中GSH-PX和CAT含量增加,心组织中CK和LDH减少;脑组织中GSH含量升高,NO含量减少;肝、胃、心、脑等组织病理切片观察证实,牡丹花瓣冻干极细粉各组与模型组相比,对水肿、炎症的改变显著。说明,牡丹花瓣冻干极细粉具有明显防治酒精所致小鼠急性肝、胃等损伤的作用。实验四:牡丹花瓣冻干极细粉防治小鼠慢性酒精性肝损伤的作用。60只小鼠随机分成对照、模型、联苯双酯、牡丹花瓣冻干极细粉低、中、高剂量组。对照组与模型组灌胃等容量蒸馏水,其余组分别灌胃150 mg/kg联苯双酯和80 mg/kg、160 mg/kg、320 mg/kg牡丹花瓣冻干极细粉,每次给药后0.5小时,除对照组外,其余各组灌胃红星二锅头(第1周使用40%的56度白酒,2-3周将白酒的浓度依次提高5%,第4周开始灌胃56度白酒;前2周剂量为10 m L/kg,后2周剂量为12 m L/kg)。每天1次,连续30天。结果表明,牡丹花瓣冻干极细粉组可显著改善小鼠因酒精导致的食欲不振、体重下降和肝、胃、心、脑系数等指标异常情况;显著降低血清中AST、ALT和肝组织中的TG、MDA含量,升高肝组织中ADH和SOD和胃组织中GSH-PX和CAT活性;降低心组织中CK和LDH活性;增高脑组织中GSH活力、降低NO含量;肝、胃、脑、心等组织病理切片观察证实,牡丹花瓣冻干极细粉各组与模型组相比,水肿、炎症等均有明显缓解,尤其中剂量组病理改善最显著(基本恢复到正常水平)。结论:首次检测了陕西合阳牡丹花瓣冻干极细粉中的营养成分,证实其所含营养成分较丰富,尤其是维生素C和人体必需氨基酸含量较高,还富含人体必需化学元素等。明确牡丹花瓣冻干极细粉中没食子酸等6种化学成分的含量。证实牡丹花瓣冻干极细粉对酒精诱发的小鼠急性和慢性肝损伤均具有显著防治作用。
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