离子液体在毛细管电泳体系分析葛根异黄酮中的应用

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离子液体为室温熔融盐,完全由有机阳离子和各种阴离子组成。离子液体具有不易挥发、溶解力强以及导电性好等特殊性质,作为添加剂或电解质已被广泛应用于毛细管电泳(CE)分析中。葛根是一味具有多种药理功效的常用中药材,异黄酮是其中含量高且活性强的重要成分,但在《中华人民共和国药典》(2010)中,对葛根的质量控制仅限于葛根素的含量测定。因此,发展快速、简便、可靠的分析方法同时测定多个葛根异黄酮对于葛根的质量控制具有重要的意义。本文将离子液体作为CE添加剂、表面活性剂或油相,建立CE分析方法包括毛细管区带电泳(CZE)、毛细管胶束电动色谱(MEKC)和微乳液毛细管电动色谱(MEEKC)用于同时测定葛根中的8个异黄酮(葛根素、大豆苷、大豆苷元、芒柄花苷、芒柄花素、染料木苷、染料木素和鹰嘴豆芽素A)。本论文主要包含五个部分(章节):第一部分为绪论部分,首先综述了离子液体在CE分离分析天然产物中的应用,包括CZE、MEKC、MEEKC及非水毛细管电泳(NACE)。其次对中药葛根进行简要的概述。第二部分建立了一种分离分析8个异黄酮的CZE方法并用于测定其在三个葛根样品(广西粉葛、广西野葛和湖北野葛)中的含量。通过比较4个有着不同阴阳离子组成的离子液体作为添加剂对异黄酮分离的影响,结果在硼砂缓冲液中添加BMIm BF4更有利于异黄酮的分离,并在优化各个实验参数的基础上实现了8个异黄酮的快速(约9 min)分离。在离子液体添加CZE分析异黄酮中,可能通过分析物与离子液体的咪唑阳离子部分之间的静电引力而体现出分离的选择性。第三部分考察了组成胶束的4种表面活性剂包括SDS、CTAB、Tween-20和C12MIm BF4在形成的单一胶束体系、单一胶束溶液中添加离子液体BMIm BF4的体系以及SDS、C12MIm BF4分别与Tween-20形成的二元胶束体系的MEKC方法对8个异黄酮的分离效果。最后对比了两个分离效果较好的体系包括SDS+BMIm BF4与SDS+Tween-20在20 h内的分离和基线稳定性,发现前者占优,分析时间也更短(约7 min)。最后将建立的MEKC方法应用于葛根样品中8个异黄酮含量的测定。第四部分以SDS作表面活性剂,正丁醇为助表面活性剂,考察比较了正辛烷、BMIm PF6和BMPy[NTf2]为油相的MEEKC;以及以CTAB为表面活性剂,正丁醇为助表面活性剂,正辛烷为油相的MEEKC对8个异黄酮分离的影响。综合比较分离度、基线噪声、峰形以及稳定性,选择了分析时间只需7 min的SDS-正丁醇-正辛烷微乳液体系。最后对所建立的MEEKC方法进行方法学考察并用于测定葛根中异黄酮的含量。第五部分为实验总结和展望。由本文的测定结果可知,野葛的异黄酮含量和种类远多于粉葛,这为我们选择葛根作为食材或药材提供参考。另一方面本文CE实验部分都应用了离子液体,但所扮演的角色不尽相同,分别作为:添加剂、表面活性剂以及微乳液油相等。离子液体的应用有助于提高CE分析天然产物的分离分析效率,因此值得进一步推广离子液体的相关应用。
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