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第一部分黄芪甲苷对慢性哮喘模型小鼠气道炎症和气道重塑的影响目的:观察黄芪甲苷对慢性哮喘模型小鼠气道炎症和气道重塑的影响。方法: 48只BALB/c小鼠按随机原则分成对照组、哮喘组、黄芪甲苷组和布地奈德组,每组12只。OVA致敏后,1%OVA雾化每周三次,每次30分钟,共8周,黄芪甲苷(50mg/Kg)灌胃,每日一次,共8周,布地奈德混悬液每日一次雾化,共8周。末次激发24h后,使用Anires 2005小动物肺功能分析系统进行气道反应性测定,取肺组织病理切片行苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织炎性细胞浸润情况,PAS染色观察杯状细胞增生情况,Masson三色染色观察上皮下纤维化情况,肺组织进行羟脯氨酸测定观察肺组织胶原含量,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别检测4组小鼠血清总IgE和BALF中IL-4、IL-13和VEGF的水平。采用免疫组化半定量法测定气道壁胶原α-SMA、VEGF和TGF-β1的表达,使用Western blot观察肺组织TSLP的蛋白表达,使用real-time PCR观察TGF-β1和TSLP mRNA的表达。结果:对小鼠肺阻力(RL)检测发现,随着氯化乙酰胆碱浓度浓度的增加,哮喘组小鼠RL明显增加,正常组小鼠RL轻度增加,四组小鼠的基础气道阻力没有差异(P<0.05),当氯化乙酰胆碱浓度在30μg/kg以上时,哮喘组小鼠RL显著高于正常组小鼠(P<0.01),黄芪甲苷组和布地奈德组小鼠与哮喘组小鼠相比有统计学意义(P<0.05),黄芪甲苷与布地奈德组小鼠之间无统计学意义(P>0.05);哮喘组小鼠BALF中炎性细胞总数和EOS细胞数高于正常组小鼠(P<0.01),黄芪甲苷组和布地奈德组小鼠BALF中炎性细胞总数和EOS细胞数明显降低,与哮喘组小鼠相比有统计学意义(P<0.05),黄芪甲苷和布地奈德组小鼠之间无统计学意义(P>0.05);哮喘组BALF中IL-4、IL-13和血清总IgE含量高于正常组(P<0.01),黄芪甲苷组和布地奈德组BALF中IL-4、IL-13和血清总IgE含量低于哮喘组小鼠(P<0.05);黄芪甲苷和布地奈德组两组之间无差异(P>0.05);哮喘组小鼠气道PAS阳性上皮细胞数/支气管高于正常组小鼠(P<0.01),黄芪甲苷组和布地奈德组小鼠气道PAS阳性上皮细胞数/支气管低于哮喘组小鼠(P<0.05);哮喘组小鼠支气管Masson染色面积/基底膜周径高于正常组相小鼠(P<0.01),黄芪甲苷组和布地奈德组小鼠气管Masson染色面积/基底膜周径明显降低,与哮喘组小鼠相比有统计学意义(P<0.05);哮喘组小鼠肺组织羟脯氨酸含量高于正常组小鼠(P<0.01),黄芪甲苷组和布地奈德组小鼠肺组织羟脯氨酸含量减低,与哮喘组相比有统计学意义(P<0.05);哮喘组小鼠支气管α-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径与正常组小鼠相比显著增加(P<0.01),黄芪甲苷组和布地奈德组小鼠支气管α-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径低于哮喘组小鼠(P<0.05)。哮喘组小鼠肺组织TGF-β1和TSLP的蛋白和mRNA表达高于正常组(P<0.05),黄芪甲苷和布地奈德组小鼠肺组织TGF-β1和TSLP的蛋白和mRNA表达与哮喘组相比降低(P<0.05),哮喘组小鼠肺组织和BALF中的VEGF蛋白表达高于正常组(P<0.01),黄芪甲苷和布地奈德组小鼠肺组织和BALF中的VEGF蛋白表达低于哮喘组小鼠(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可在一定程度上抑制哮喘模型小鼠的气道炎症,气道高反应性和气道重塑,这种抑制作用可能与抑制TGF-β1、TSLP和VEGF的表达有关。第二部分黄芪甲苷对A549细胞TSLP基因表达的影响目的:观察黄芪甲苷对TSLP基因表达的影响以及此作用是否与核因子-κB有关。方法:TNF-α+IL-4刺激A549细胞4小时、10小时和18小时后,使用real-time PCR方法观察A549细胞TSLP mRNA表达的变化;选择4小时时间点,使用real-time PCR方法观察黄芪甲苷以及NF-κB抑制剂PDTC对TSLP mRNA表达的影响,使用western blot方法观察黄芪甲苷对TNF-α+IL-4刺激半小时后A549细胞胞浆IκBα表达的影响,使用免疫荧光观察TNF-α+IL-4刺激1小时后NF-κB P65核转录的变化。结果:TNF-α+IL-4刺激A549细胞后TSLPmRNA表达明显增加,4小时增加最明显,10小时逐渐下降,18小时后基本降到正常;PDTC能够显著抑制TSLP mRNA表达,黄芪甲苷抑制作用不明显;黄芪甲苷能够显著抑制A549细胞NF-κB P65的核转录,升高胞浆IκBα的蛋白水平。结论:气道上皮细胞A549细胞中NF-κB对TSLP基因具有重要的调控作用,黄芪甲苷能够升高胞浆IκB-α的蛋白水平,抑制NF-κB的核转录,但黄芪甲苷对TSLP的基因表达没有抑制作用。