【摘 要】
：
该研究以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WHNB02中性植酸酶phyC基因为目的基因(GenBank Accession No.AY220075),在成熟肽序列之前设计上游引物,在终止密码子处设计下游引物
论文部分内容阅读
该研究以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WHNB02中性植酸酶phyC基因为目的基因(GenBank Accession No.AY220075),在成熟肽序列之前设计上游引物,在终止密码子处设计下游引物(引入BamHI/SalI).用含高保真度的聚合酶TaqPlus进行扩增,得到了大小约1.1kb的单一条带产物,获得phyC基因表达片段,将该产物与pUC18-T载体进行连接,酶切鉴定后,经BamHI和SalI酶切回收处理phyC片段,连接到大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌JM109,在含100μg/ml的Amp抗性的LB平板上筛选后,经菌落PCR及酶切鉴定,获得阳性克隆菌株.用终浓度为0.1mM IPTG在含100μg/ml的Amp抗性的LB中诱导表达,酶活测定结果表明,表达产物具有植酸酶活性.SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带,相对分子量(Mr)为69kD,30 ℃诱导3h后,表达的目的蛋白量占菌体总蛋白的47.4﹪.在成熟肽序列之前设计上游引物,在终止密码子处设计下游引物(引入BamHI/SacI).用含高保真度的聚合酶TaqPlus进行扩增,得到了phyC基因表达片段,将该产物与pUCm-T载体进行连接,酶切鉴定后,将该产物经BamHI和SacI酶切处理后连接到含有胚乳特异性启动子(EGH5 promoter)的中间载体pBPC47的多克隆位点上,转化大肠杆菌JM109菌株,在含100μg/ml的Amp抗性的LB平板上筛选到了的阳性菌落.质粒酶切分析和菌落PCR分析结果表明获得了pBPC-phyC重组质粒;在分析了pBPC47载体的基础上,选用了三酶切,先用BglⅡ和HindⅢ双酶切中间重组载体pBPC-phyC,再用Xhol单酶切,回收了三酶切片段,把启动子-phyC-终止子(EGH5-phyC-NOS)片段插入到经HindⅢ、BamHI双酶切的表达载体pCAMBIAl300的多克隆位点,转化大肠杆菌JMl09后,经60μg/ml Kana抗性筛选、菌落PCR、质粒酶切鉴定后,筛选到了阳性转化菌落,质粒酶切分析结果表明获得了pB-C-phyC重组表达载体,并用基因枪法成功转化玉米愈伤组织.该研究为中性植酸酶基因在微生物及植物中的高效表达奠定了良好的基础,具有重要的学术价值和应用前景.
其他文献
输电线路长期暴露于室外,受复杂气候、电荷变化等因素影响,导致线路连接部件螺栓松动、导线断股、金具破损等线路故障。为了保证电能的稳定传输,电力作业人员需穿着屏蔽服在高危、高压的环境中作业。利用电力作业机器人代替人工作业是解放检修人员劳动力的一种有效方式。但目前电力作业机器人仍存在自动化程度低、作业效率不高等缺点。近年来机器视觉检测技术在各大领域中得到了广泛的应用,其中深度学习作为新兴视觉检测技术表现
摘要：本课题主要根据语文教学中的相关实例，介绍如何通过优秀的情景导入调动学生学习语文的积极性，培养学生的思维能力和创新理解能力，从而构建和谐、高效的语言课堂环境，帮助学生提高学习语言的兴趣和动力。 关键词：语文教学；创新协作；学习兴趣；高效课堂 中图分类号：G633.3 文献标识码：A 文章编号：1992-7711（2016）02-0127 著名教育家叶圣陶先生说过：“教师之为教，不在全盘授
真菌病害是导致作物减产的重要因素之一，利用广谱抗真菌新资源和新基因培育持久抗病新品种是农业食品安全的重要保证。建立在分子遗传学、分子生物学基础上的基因工程技术为之提供了一条可行的途径。利用转基因技术将抗病基因转入植物，来提高植物的抗病性是目前培育抗病品种的重要策略之一。 本实验以本明烟(Nicotiana benthamiana)的叶盘为受体，通过农杆菌介导法将不同来源的基因(SPCEMA：
本文以21例2～5岁中国儿童的肠道菌群为研究对象，利用传统培养计数法和分子生物学技术，对此年龄段健康儿童的肠道菌群分布进行了定量研究，特别是在种水平上研究了其中双歧杆菌和乳
METH-1是一种新发现的具有抗血管生成和抑制内皮细胞增殖活性的蛋白质.METH-1基因最初是以TSP1具有抗血管生成活性区域序列的EST为探针,从成年人心脏cDNA文库中分离得到的.本
杨树是我国重要的树种之一,它生长速度快,易繁殖,在木材工业?纸浆业和绿化带建设中广泛应用,是人工林和大面积速生商品林建设的首选树种? 本研究建立了美洲黑杨 G2 叶片培
船舶基座的平面度是影响船舶建造质量的重要因素之一。为了保证船舶建造质量,有必要对船舶基座表面形状误差进行检测。在目前生产中,对基座表面形状误差的检测主要安排在加工
模数转换器ADC是模拟信号系统和数字信号系统间的接口，广泛应用于传感器、音频视频、仪表、通信等领域，在信号处理系统中有着重要地位。随着信息技术的不断发展，人们对ADC的性能
随着现代电子技术和嵌入式技术的不断发展，导航雷达的成本越来越低，性能越来越高。嵌入式导航雷达终端成为导航雷达的一个新的发展方向，越来越多的嵌入式技术应用到雷达的开发上